双波长动力学吸光光度法测定

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GAOJIAOLUNTAN高教论坛蚄羄蒃莇羂羃膂薃羈羃莅蒆袄羂蒇蚁螀羁膇蒄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁肈蒄蚈螇肇膃蒀蚃肇莆蚆虿肆蒈蕿羇肅膈螄袃肄芀薇蝿肃莂螃蚅肂蒄薅羄膁膄莈袀膁芆薄螆膀葿莆螂腿膈蚂蚈膈芁蒅羇膇莃蚀袃膆蒅蒃蝿芆膅蚈蚅芅芇蒁羃芄莀蚇衿芃薂蒀袅节节螅螁衿莄薈蚇袈蒆螃羆袇膆薆袂袆芈螂螈羅莀薄蚄羄蒃莇羂羃膂薃羈羃莅蒆袄羂蒇蚁螀羁膇蒄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁肈蒄蚈螇肇膃蒀蚃肇莆蚆虿肆蒈蕿羇肅膈螄袃肄芀薇蝿肃莂螃蚅肂蒄薅羄膁膄莈袀膁芆薄螆膀葿莆螂腿膈蚂蚈膈芁蒅羇膇莃蚀袃膆蒅蒃蝿芆膅蚈蚅芅芇蒁羃芄莀蚇衿芃薂蒀袅节节螅螁衿莄薈蚇袈蒆螃羆袇膆薆袂袆芈螂螈羅莀薄蚄羄蒃莇羂羃膂薃羈羃莅蒆袄羂蒇蚁螀羁膇蒄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁肈蒄蚈螇肇膃蒀蚃肇莆蚆虿肆蒈蕿羇肅膈螄袃肄芀薇蝿肃莂螃蚅肂蒄薅羄膁膄莈袀膁芆薄螆膀葿莆螂腿膈蚂蚈膈芁蒅羇膇莃蚀袃膆蒅蒃蝿芆膅蚈蚅芅芇蒁羃芄莀蚇衿芃薂蒀袅节节螅螁衿莄薈蚇袈蒆螃羆袇膆薆袂袆芈螂螈羅莀薄蚄羄蒃莇羂羃膂薃羈羃莅蒆袄羂蒇蚁螀羁膇蒄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁肈蒄蚈螇肇膃双波长动力学吸光光度法测定中蒙药中痕量锰娜日斯摘要：研究了痕量锰氧化萘酚绿褪色和生色反应及其动力学条件，并应用570和710nm双波长组合，建立了测定痕量锰的新方法．测定线性范围为8～22.5μg·ml-1，检出限为6.8μg·ml-1。该方法用于中蒙药中痕量锰的测定，获得满意结果。关键词：双波长动力学吸光光度法锰-4-GAOJIAOLUNTAN高教论坛吸光光度法测定锰已有报道，"#$%&但采用双波长动力学吸光光度法测定痕量锰的方法还未见报道。本文通过试验观察到痕量锰可以氧化萘酚绿(NG)褪色和生色反应，并应用双波长组合建立了测定痕量锰的新方法．该方法体系稳定，操作简便，选择性和重现性较好，用于中药红参、鲜人参和蒙药壮西—2l、古日古木中痕量锰的测定，结果满意。1试验部分1.1仪器与试剂721型分光光度计UV—240型分光光度计(日本岛津)TB—85恒温器(日本岛津)锰标准溶液：1.00mg·m1-1，称取分析纯金属锰0.2000g于100ml烧杯中，加入硝酸(1+1)5ml，溶解后移至200ml容量瓶中，用水稀释至刻度。使用时，稀释为0.05mg·ml-1工作液。NG溶液：2g·L-1所用试剂均为分析纯，水为二次石英蒸馏水。1.2试验方法于两支10m1比色管中，分别加入NG溶液0.50ml，其中一支比色管中加入锰标作者简介：娜日斯（1956-），女，达斡尔族，高级实验师，主要从事无机化学实验研究。-1-准工作溶液1.00ml，另一支不加。用水稀释至5.00m1，摇匀后置于90°C水浴中加热4min迅速取出，流水冷却2min中止反应，用lcm比色皿，以水为参比，在710和570nm波长处分别测量氧化和非氧化反应体系的吸光度A和A0，并计算ΔA＝ΔA710+ΔA570，ΔA710＝A0710-A710，ΔA570＝A570-A0570。2结果与讨论2.1吸收光谱-4- GAOJIAOLUNTAN高教论坛配制不同浓度组分的溶液体系，按试验方法操作，在UV—240型分光光度计上扫描各溶液体系的吸收光谱，见图．从图可看出，NG有两个吸收峰，最大正吸收峰波长为710nm，最大负吸收峰波长为-4-GAOJIAOLUNTAN高教论坛570nm．随着Mn(II)加入量的增加，在710nm处吸光度明显减小，说明在710nm处NG溶液被Mn(II)氧化而褪色，而在570nm处，随着Mn(II)入量的增加，吸光度明显增大，说明在570nm处NG溶液被Mn(II)氧化而使其生色．氧化和非氧化体系的最大正吸收波长和最大负吸收波长一致，没有新的吸收峰出现，表明Mn(II)与NG无配位反应发生，Mn（II）在体系中仅起氧化作用。而且各反应体系的最大吸收峰均在710nm处，最大负吸收峰均在570nm处，选择710和570nm为工作波长。2.2试剂用量的影响考虑到体系的吸收值在合适的读数范围内，2g·L-1NG溶液用量选择在0.5ml。2.3温度对反应速率的影响在室温下，体系几乎不反应。60°C以下体系反应缓慢，60°C以上随着温度升高，体系反应速率不断加快，ΔA值增大，90°C时ΔA最大，本文选用90°C。反应速率随温度升高不断增大的范围内，以lnΔA对1/T作田，所得直线回归方程为lnΔA=109.9-9.05×103/T，据此计算出体系反应的表观活化能为75.24KJ·mol-1。2.4加热时间和反应速率常数体系在90±0.1°C反应温度时，随着加热时间增加ΔA值增大。试验表明在1~4min内，ΔA值随加热时间改变呈线性变化，而且在4min时ΔA最大，本文选择反应时间为4min。氧化反应体系可视为准零级反应。由ΔA对t作图得一条直线，其线性回归方程为ΔA=0.025+0.19t，由此得出氧化反应体系的反应速率常数K=0.19min-1。由于在室温下体系几乎不反应，试验用流水冷却中止反应。反应中止后，试液的吸光度在30min内保持不变，表明体系很稳定。2.5工作曲线按试验方法绘制标准工作曲线．其线性回归方程为ΔA=0.651+0.1C(μg·ml-1)，r=0．9998，测定锰的线性范围为8～22.5μg·m1-1．对空白进行11次试验，测得A0的标准偏差为4.042×10-2μg·ml-1，据此计算出本法的检出限为6.8μg·ml-1。2.6干扰试验测定15μg·m1-1Mn(II)，相对误差为±5%时，以下离子(以倍数计)：Zn2+、Cd2+(1.3×103)，Cl-、Br-、F-、K+(60)，Na+、Ag+、A13+、Cu2+(20)，Ba2+、Ca2+、Ni2+、Mg2+、Fe2+(10)，Co2+(5)不干扰测定。Fe3+、I−(2)干扰测定。加入盐酸羟胺进行掩蔽可消除Fe3+干扰。2.7样品分析参考文献[6]取红参、鲜人参、壮西—21和古日古木样品粉碎，称取样品各1.0g于4个100ml烧杯中，加入消化液(HNO3+H2SO4=3+1)5ml，放置过夜，在电炉上分别消化至溶液呈黄色，冷却后，各加入20mg·ml-1盐酸羟胺10ml，分别移入100ml容量瓶中，用水稀至刻度，按试验方法测定。样品中锰的测定结果见表。-4- GAOJIAOLUNTAN高教论坛表样品中锰的测定结果（n=5）样品测得值加入量(ρ/mg·m1-1)测得值回收率%RSD%红参0.08440.05000.043181.24.7鲜人参0..06950.05000.044789.42.6壮西—210.06870.05000.045290.43.2古日古木0.05880.05000.045691.21.8参考文献：[1]吴和丹,郑肇生,丁春令等.分析化学[M].1996,24(19):1085[2]季剑渡．理化检验—化学分册[M].1997,33(7):315[3]周华方,张明珠,王镇浦.化学通报[J].1994,4:32（上接第15页）检测方法的研究也是具有坚实的理论基础和非常重要的实践意义。参考文献:[1]殷　震,刘景华.动物病毒学[M].2版.北京:科学出版社,1997:777-795.[2]俞永新.狂犬病和狂犬病疫苗[M].北京:中国医药科技出版社,2001.1-18.[3]BourhyH,KissiB,ordoN.Moleculerdiversityofthelyssavirusgenus[J].Virology,1993,194(1):70-81.[4]TakitaSY,fujiiH,MifuneK.Resistanceofmicevaccinatedwithrabiesvirusinternalstructuralproteinstolethalinfection[J].Arch.Virology,1993,132(1-2):51-65.[4]章旭坤,田彤颜.分析化学[M].1991,19(7):789[5]郑肇生,白志盛.胡冶远.环境化学[M].1992,11(1):39[6]程光,倪坤仪,程坚.分析化学进展[M].南京:南京大学,1994.334[5]WuXF,GongXM,FoleyHD,etal.Bothiraltranscriptionandreplicationarereducedwhentherabiesvirusnucleoproteinisnotphosphorylated[J].JVirol,2002,76(9):4153-4161.[6]YangJ,HooperDC,WunnerWH,eta1.ThespecificityofrabiesvirusRNAencapsidationbynucleoprotein[J].Virology,1998,242(1):107-117.[7]张永振.中国狂犬病流行病学特征及防制建议[A].全国人畜共患病学术研讨会论文集[C].北京,2006,64-68.[8]熊毅,刘棋,朱伟,等.广西狂犬病分子流行病学的研究[A].-4- GAOJIAOLUNTAN高教论坛全国人畜共患病学术研讨会论文集[C].2006,102-105.节蒅衿肈蒈莁袈膀芁蝿袇羀薆蚅袆肂荿薁袅膄薅蒇袄芆莇螆袄羆膀蚂羃肈莆薈羂膁膈蒄羁袀莄莀羀肃膇蝿罿膅蒂蚅羈芇芅薁羈羇蒁蒇羇聿芃螅肆膂葿蚁肅芄节薇肄羄蒇蒃蚁膆芀葿蚀芈薅螈虿羈莈蚄蚈肀薄薀蚇膂莇蒆螆芅腿螄螅羄莅蚀螅肇膈蚆螄艿莃薂螃罿芆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芆蒀蕿衿羅节蒅衿肈蒈莁袈膀芁蝿袇羀薆蚅袆肂荿薁袅膄薅蒇袄芆莇螆袄羆膀蚂羃肈莆薈羂膁膈蒄羁袀莄莀羀肃膇蝿罿膅蒂蚅羈芇芅薁羈羇蒁蒇羇聿芃螅肆膂葿蚁肅芄节薇肄羄蒇蒃蚁膆芀葿蚀芈薅螈虿羈莈蚄蚈肀薄薀蚇膂莇蒆螆芅腿螄螅羄莅蚀螅肇膈蚆螄艿莃薂螃罿芆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芆蒀蕿衿羅节蒅衿肈蒈莁袈膀芁蝿袇羀薆蚅袆肂荿薁袅膄薅蒇袄芆莇螆袄羆膀蚂羃肈莆薈羂膁膈蒄羁袀莄莀羀肃膇蝿罿膅蒂蚅羈芇芅薁羈羇蒁蒇羇聿芃螅肆膂葿蚁肅芄节薇肄羄蒇蒃蚁膆芀葿蚀芈薅螈虿羈莈蚄蚈肀薄薀蚇膂莇蒆螆芅腿螄螅羄莅蚀螅肇膈蚆螄艿莃薂螃罿芆蒈螂肁蒁螇螁膃芄蚃螀芆蒀蕿衿羅节蒅衿肈蒈莁袈膀芁蝿袇羀薆蚅袆肂荿薁袅膄薅蒇袄芆莇螆袄羆膀蚂羃肈莆薈羂-4-