四环素免疫层析试纸条检测方法的研究

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1、万方数据分类号：TS201．6密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：11813004四环素免疫层析试纸条检测方法的研究STUDYoNTHEIMMUNoCHRoGRAPHICTESTSTRIPFoRTHEDETERMINATIoNoFTETRACYCLINE专业名称：营养与食品卫生学指导教师：方国臻教授研究生姓名：高楠申请学位级别：医学硕士论文提交日期：2014年3月论文课题来源：“十二五”国家科技支撑项目学位授予单位：天津科技大学万方数据天津科技大学学位论文原创性声明JIJII)JllllllJIIIIII)lll

2、llllllllllllllllllllllllIY2755068本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：内牛f甲R期：如I毕年；月5日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完

3、成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：南弄印日期：如Jv年弓月，日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部

4、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密U(请在方框内打“、／”)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密叵K请在方框内打c·√，，)。作者签名：南卿R期：导师签名：疡珠同期：如，必年钥歹同k，讧年≥月歹同万方数据摘要本研究建立了四环素胶体金免疫层析检测方法，并应用于动物源性食品中四环素的快速检测。利用甲醛法将四环素与阳离子化的牛血清白蛋白(cBSA)偶联制各包被抗原(TC—cBSA)。采用ProteinA—Sepharose4B免疫亲和层析法纯化四环素特异性抗血清获得四环素多克

5、隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nlTl的胶体金，优化得到制备金标抗体的最适pH为8．0，最适抗体量为24儿。通过各种条件的优化，将包被抗原(TC．cBSA)1：1稀释、羊抗兔二抗1：100稀释，分别固定在硝酸纤维素薄膜上作为检测线和质控线，将金标抗体1：3稀释喷涂到O．05％SDS．L处理的金标挚上，经过组装制成四环素胶体金免疫层析试纸条。四环素免疫层析试纸条的检出限：在标准品溶液中的视觉检出限均为40}l∥L，检测时间为5min。对牛奶进行离心稀释处理，蜂蜜稀释处理，猪肉、牛肉、鸡肉、鱿鱼、大眼鲷鱼、比目鱼、虾、三文鱼和

6、鲈鱼用3％的三氯乙酸处理，直接用试纸条进行检测。其中牛奶的视觉检出限为40p∥L，其余10种样品的视觉检出限为80gg／kg，均低于最高残留限量(MRLs)。所建立的四环素免疫层析分析方法与酶联免疫分析方法的一致性较好，说明方法有较好的准确性。四环素免疫层析试纸条在室温密封干燥的条件下保存，至少3个月检测结果不受影响。特异性较好，操作方便、快速，结果稳定、可靠，可作为四环素残留的现场监控筛检手段。本论文还对氧化石墨烯．胶体金免疫层析试纸条进行了初步探索，采用柠檬酸三钠还原法合成了氧化石墨烯．胶体金，优化得到标记抗体的最适pH为8．0，

7、最适抗体量为24肚。此试纸条视觉检出限为20“∥L，较传统胶体金试纸条有所进步，为今后深入研究奠定了基础。关键词：四环素；胶体金；氧化石墨烯；免疫层析试纸条；快速检测万方数据ABSTRACTInthisstudy,acolloidalgoldimmunochromatographicrapidteststripwasdevelopedandeffectivelyappliedforrepiddeterminationoftetracyclineinanimal—derivedfood．Thecoatingantigenwasprepa

8、redbyconjugatingtocationicbovineserumalbumin(cBSA)accordingtotheformaldehydemethod．Anti—tetracyclinepolyclonal