基于mir528靶向水稻光温敏核不育系hd9802s的候选不育基因hdtms

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1、分类号：学校代号：10512学号：秘密☆年直接填写相应的密级和保密期限，字体为四号黑体。公开论文此处为空。湖北大学硕士学位论文（论文题名和副题名）作者姓名：朱丽娜指导教师姓名、职称：居超明副教授申请学位类别：硕士学位学科专业名称：遗传学研究方向：植物遗传学论文提交日期：年月日论文答辩日期：年月日学位授予单位：湖北大学学位授予日期：年月日答辩委员会主席：论文题目ApplicationoftheWaveletAnalysisintheFaultDiagnosisofRotatingMachines“硕士学位论文”字样AThesisSubmittedfo

2、rtheDegreeofMaster作者姓名、指导教师姓名Candidate：ZhuLinaSupervisor：Prof.JuChaomingHubeiUniversityWuhan,China湖北大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日学位论文使

3、用授权说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以允许采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存学位论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公开学位论文的部分或全部内容。（保密论文在解密后遵守此规定）作者签名：日期：指导教师签名：日期：摘要光温敏核不育水稻是一种珍贵的种质资源，为了能更好的利用该资源，必须对光温敏核不育水稻的不育基因的遗传机理及分子生物学方面进行广泛深入的研究。目前知道光温敏核不

4、育基因的分布非常广泛，在不同的光温敏核不育系中表现出较大的差异。实验室前期的研究结果显示：该不育系HD9802S的育性受一对主效隐性基因控制，且将该不育基因定位位于水稻第二号连锁群上的SSR分子标记RM5897和RMAN8之间，进一步精细定位于第二号连锁群上的SSR分子标记RM12729和RM12732之间。将RM5897和RMAN8之间的约50K的物理距离称作光温敏核不育系水稻HD9802S候选不育基因HDtms。在BGIRiseGenomeDatabase数据库中检索到位于RM5897和RMAN8之间的序列（编号为Scaffold002359）

5、，运用Fgenesh软件预测Scaffold002359之间的可能存在的基因，并成功预测了3个基因7个编码区，对7个编码区分别运用amiRAN靶的设计原则设计了21个干扰的靶位点。本研究中amiRAN双元表达载体的构建是分两步来进行的。首先是供体载体的构建：光温敏核不育系水稻HD9802S的候选不育基因HDtms的7个编码区21个靶位点的序列，利用PCR技术将该7个编码区的21个靶位点分别替换miR528的靶位点，而侧翼及环的结构与miR528保持一致，使其转录后RNA结构类似于miR528结构。其次是amiRAN双元表达载体的构建：将测序正确的中

6、间载体通过结合转移mating-assistedgeneticallyintegratedcloning（MAGIC）将目标表达单元转移到双元表达载体，并通过电转法转入农杆菌EHA105中。为了能够进一步探索候选不育基因HDtms的精确位置和功能，我们将构建好的双元amiRNA表达载体通过农杆菌介导的方法转入模式籼稻9311中，目前带有抗性的水稻小苗已经分化出了，对其相关性状的研究有待进一步的验证。关键词：水稻amiRAN表达载体转基因PCR光温敏核不育基因AbstrackKeyWords：目录第一章文献综述11.1光温敏不育水稻的研究概况11.2

7、miRNA干扰研究概述31.2.1miRNA的发现31.2.2miRNA的发生及作用机制41.2.3人工miRNA的概述71.2.4siRNA和miRNA作用机制的关系81.3构建质粒克隆载体的基本策略91.4后基因组学研究概述与基因功能研究方法101.4.1后基因组学概述101.4.2后基因组研究的内容及方法101.5植物的遗传转化及基因功能研究101.5.1植物转基因的研究进展111.5.2基因功能研究111.6本研究的目的和意义13第二章材料和方法142.1供试材料142.1.1水稻材料及质粒和菌株142.1.2实验培养基152.1.3主要试

8、剂和仪器152.2试验方法152.2.1HD9802S候选不育基因HDtms人工miRNA表达载体的构建152.2.2籼稻