leptin调控鹅卵泡颗粒细胞的增殖凋亡、脂质代谢及类固醇激素合成研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityDoctorDegreeDissertationTheleptinregulatesgranulosacellproliferation，apoptosis，lipidmetabolismandsteriodhormonesynthesisByQihaiXiaoDirectedbyProf．JiwenWangAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGeneticsandWaterfowlBreedingThecollegeo

2、fAnimalScienceandTechnology,SichuanAgficulturalUniversityYa’an，SichuanProvince，ChinaMay,2014万方数据论文指导小组成员李亮(教授)韩春春(副研究员)本论文由国家水禽产业技术体系(CARS．43．6)、㈣㈣㈣㈣帆JO120581四川省畜禽育种攻关项目(2011NZ0099．8)和四川教育厅创新团队项目(13TD0034)资助本试验在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室"完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导

3、师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：关于论文使用授权的声明年月日本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方

4、式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“4”)勰容出链钽似谚研究生签名：胪钐匀矿导师签名：陇义年月日年月日万方数据摘要禽类卵泡的发育伴随着颗粒细胞的增殖与凋亡、卵泡内脂质的增多及卵泡内类固醇激素含量的改变。众多研究表明，leptin在卵泡发育过程中扮演着重要的调控角色，然而其调控结果却不甚一致：对颗粒细胞有促增殖抑凋亡、抑增殖促凋亡及作用不明显三种调控结果，对卵泡内类固醇激素及胞内脂肪酸有促合成与抑合成两种调控结果。此外，普遍认为禽类卵巢没有合成脂质的能力，卵泡

5、脂质几乎全部源于肝脏，此种观点有待于进一步考证。为研究leptin对卵泡发育的调控作用及机理，本试验分别从组织、细胞、基因及激素水平入手，探讨leptin与颗粒细胞增殖与凋亡、卵泡内类固醇激素含量改变及卵泡内脂质代谢之间的关系。研究内容为：(1)通过鹅颗粒细胞培养、leptin及P13K／Akt／mTOR信号通路抑制剂处理，采用BrdU标记及实时定量等实验方法，分析“leptin．P13K／AM／mTOR信号通路．卵泡颗粒细胞增殖与凋亡”之间的关系；(2)通过鹅颗粒细胞培养、leptin及P13K／Akt／mTOR信号抑制剂处理，运用油红O染

6、色及实时定量等实验手段，分析“leptin．P13K／Al(t／mToR信号通路．卵泡脂质代谢”之间的关系；(3)通过鹅颗粒细胞培养、leptin及P13K／Akt／mTOR信号抑制剂处理，采用ELISA及实时定量等技术手段，分析“leptin．P13K／Akt／mTOR信号通路．卵泡类固醇激素含量’’之间的关系。取得的主要研究结果如下：(1)鹅各级卵泡颗粒细胞中表达leptin．R。4-6turn卵泡表达量最高，随后呈下降趋势，但在F5中略有回升。(2)Leptin调控鹅体外培养颗粒细胞中leptin-R、增殖、凋亡及P13K／Al(t／m

7、TOR信号通路成员相关基因的转录表达，但具有剂量效应。低浓度leptin(1或10ng／mL)处理组，却以刀．R、CDJ、CD2、CD3、BcL2及P13K／Akt／mTOR信号通路成员相关基因的表达量显著高于对照组；高浓度leptin(100ng／mL)处理组，上述基因的表达量显著低于低浓度leptin(1或10ng／mL)处理组(p<0．05)。(3)P13K／Al(t／mTOR信号通路抑制鹅体外培养颗粒细胞中CDl、CD2、CD3及BcL2的转录表达。LY294002及Rapamycin处理组，上述基因表达量显著高于对照组(p<0．05

8、)。万方数据(4)体外无血清培养的鹅颗粒细胞有合成脂质的能力，脂滴含量随着培养时间的延长而增多(贴壁培养0h脂滴较少，24h脂滴增多并主要聚集在细胞膜附近，48h后