转染cx43cdna对脑胶质瘤c6细胞侵袭性影响的体外研究

《转染cx43cdna对脑胶质瘤c6细胞侵袭性影响的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南昌大学硕士学位论文转染Cx43cDNA对脑胶质瘤C6细胞侵袭性影响的体外研究姓名：唐容申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：蒋丽萍201206摘要研究背景：神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发肿瘤。其侵袭性行为是恶性胶质瘤最重要的标志之一，使其预后不良，术后易复发。因此，胶质瘤侵袭性研究成为热点。肿瘤细胞侵入正常组织是一个多因素参与的过程，主要包括三个环节：粘附、ECM降解及迁移。MMPs降解ECM，为胶质瘤侵袭提供空间。Cx43在中枢神经系统表达最为丰富，且主要分布在星形胶质细胞中；在恶性胶质瘤中心，Cx43低表达，而在肿块边缘Cx43高表达

2、。研究表明，IⅢA干扰抑制Cx43表达能抑制肝癌细胞侵袭，但Cx43与鼠脑胶质瘤C6细胞侵袭之间的关系尚不明确。因此，本实验通过脂质体介导C6过表达Cx43，探讨其与C6细胞侵袭性的关系及可能的机制，为临床防治脑胶质瘤提供新的思路和策略。目的：将pCMV-Cx43cDNA重组质粒转染入鼠脑胶质瘤C6细胞，上调C6细胞Cx43表达。探讨过表达Cx43对脑胶质瘤侵袭性的影响及机制。方法：1、通过脂质体将pCMV-Cx43cDNA重组质粒转染入C6细胞，使C6细胞过表达Cx43，并用G418抗性筛选出稳定过表达Cx43的C6细胞。2、用Wbstemblo

3、t及RT-PCR分别检测Cx43蛋白及CX43IIl】[矾A表达。3、建立体外Tralls、耽11侵袭模型联合MTT法，观察Cx43对C6细胞侵袭能力的影响。4、用明胶酶谱法检测细胞培养液中MMP．2、MMP．9活性的强弱。5、Westemblot检测MMP．9蛋白表达。结果：l、成功将pCMV．Cx43cDNA重组质粒转入C6细胞，并用G418筛选得到稳定转染Cx43基因的细胞株(C6．Cx43细胞)及转染空载体的细胞株(C6-non细胞)。2、RT-PCR：C6细胞、C6．Cx43细胞及C6-non细胞Cx43删[ⅢA相对表达量分别为：1．15

4、±O．05、1．86±0．07、1．08±O．05，C6．Cx43细胞比C6及C6-non细胞Cx43111][矾A表达量明显增加，差异有统计学意义(P

5、，提示C6．Cx43细胞的侵袭能力较C6-non、C6细胞明显增强。4、明胶酶谱法显示，C6．Cx43细胞培养液中MMP．9活性明显增强，与C6．non、C6细胞比较，差异有统计学意义(P<0．01)。5、WeStemblot：C6细胞、C6．Cx43细胞及C6．non细胞MMP．9蛋白相对表达量分别为0．29±0．03、O．43±O．02、O．27±O．01，C6．Cx43细胞比C6、C6-non细胞MMP．9蛋白表达量明显增加，差异有统计学意义(P<0．05)。结论：1、C6细胞成功转染重组质粒pCMv-Cx43cDNA，C6．Cx43细胞Cx

6、43mIⅢA及Cx43蛋白表达明显增加，C6一Cx43细胞侵袭能力明显增强。2、C6细胞过表达Cx43后细胞侵袭能力增强，可能与MMP．9活性增强、MMP．9蛋白表达上调有关。关键词：胶质瘤细胞C6；过表达；Cx43；侵袭；MMP．9IIIAbs仃act——————————————————————————————————————————————————————一AbstractBackground：Gliomaist11emostcommonprimar)，tumorincentralneⅣoussystem．OneofmemoStimponant

7、hallmarksofm2Lli印antgliomistlleirinvaSiVebehaViorwKchmakesitapoorprognosisalldrecurrence．Thlls，gliomainVausiVeresearchhaSbecomeahottopic．IIlvaSionoftllmorcellsintonomaltissueistlloughttobeamulti．‰rialprocess，mailllyconsistingofadllesion，ECMde伊adationandIIli删ion．Matrixmetallopr

8、oteiI搬；esdegradeECM，crea血培Spaceforinvadinggliomacells．Cx43ism