大鼠触液核降钙素基因相关肽的分布及其在内脏痛中的作用

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1、徐州医学院硕士学位论文大鼠触液核降钙素基因相关肽的分布及其在内脏痛中的作用姓名：王家友申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：张砺团2012-04徐州医学院硕士学位论文大鼠触液核降钙素基因相关肽的分布及在内脏痛中的作用中文摘要目的1．观察正常大鼠触液核(cerebrospinalfluid—contactingnucleus，CSF—CN)降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide，CGRP)的分布。2．内脏痛大鼠触液核CGRP的变化。3．通过外源性的CGRP和CGRP受体拮抗

2、剂CGI冲8—37注入大鼠触液核进一步探究CGRP对内脏痛调控中的作用。方法实验用Sprague-Dawley大鼠，分组如下：1．SD大鼠，正常组(n=8)，大鼠处死前48h侧脑室注射霍乱毒素B亚单位(choleratoxinB，CB)逆行追踪定位CSF．CN，采用免疫荧光双标确定在触液核有无CGRP的分布；2．内脏痛模型分两组：直结肠扩张组(noxiousphasiccolorectaldistension，CRD)，伤害性直结肠扩张(80mmHg)模拟内脏高敏性(visceralhypersensitivi

3、ty，VH)模型和对照组：非伤害性直结肠扩张(20mrnHg)。通过行为学和肌电分析分别观察了腹壁回撤反射评分(abdominalwithdrawalreflex，AWR)和腹壁外斜肌放电幅度(electromyographicactivity，EMG)。采用侧脑室注射霍乱毒素B亚单位(choleratoxinB)追踪定位CSF—CN，免疫荧光双标探索对照组大鼠CSF．CN和模型大鼠CSF—CN中CGRP在不同时间的分布变化；蛋白质免疫印记定量标记CGRP含量的变化趋势；大鼠痛阈和腹肌放电幅度变化与触液核中CG

4、RP变化趋势的相关性；3．探讨了外源性的CGRP和CGRP受体拮抗剂，CGRP8．37注入SD大鼠的CSF．CN上，对大鼠内脏痛行为学的变化，腹壁外斜肌放电幅度变化的影响。采用，徐州医学院硕士学位论文Image-ProPlus6．0图像软件对CGRP阳性神经元进行计数和采用Photoshop5．0对免疫印记条带进行分析。结果1．正常大鼠CB免疫阳性物质的分布CB免疫阳性物质规律而集中地分布在中脑导水管周围灰质腹侧部，而CGRP免疫阳性物质散在分布，部分CB免疫阳性神经细胞胞质中共表达CGRP免疫阳性物质，一些非

5、CB阳性神经细胞的胞质中也存在CGRP阳性物质。2．内脏痛模型的行为学和实验室结果CRD组大鼠痛阈和对照组大鼠痛阈比较显示，CPd)组大鼠痛阈有降低的趋势，模型第3天，CRD组大鼠的疼痛阈值较对照组大鼠降低明显，对照组大鼠痛阈(34．0±1．3)mmHg，CRD组大鼠是(31．3±2．3)mmHg(F=77，P<0．05)。模型组腹外斜肌放电幅度和对照组相比较，有明显增高趋势，在第3天(F=13．66，P

6、胞数没有变化，但CSF—CN的CGRP免疫阳性物质表达的神经细胞数逐渐增加。内脏痛后第5天CGRP阳性神经元数目明显增加，模型组(4764-5)，对照组(2904-5)，和对照组相比有统计学意义(F=953．66，P

7、痛行为学的变化有剂量依赖性，O．13nmol和0．26nmol的CGRP,可导致AWR评分明显降低(氏o．05)和腹外斜肌EMG放电幅度也减少伊<0．05)，0．026nmol的CGRP对AWR和腹外斜肌放电幅度没有明显影响(P>o．05)。随着CGRP齐IJ量的增加，AWR评分和EMG放电幅度减少越显著(尸<0．05)。CGRP受体拮抗剂，CGRP8—37能逆转CGI冲引起的行为学的变化(尸<0．05)。CGRP8．37的剂量越大，拮抗效果越显著。结论1．『F常大鼠CSF．CN有CGRP的分布。徐州医学院硕士

8、学位论文2．大鼠CSF-CN中CGI冲可能参与脑干水平内脏疼痛的中枢调控。3．CSF—CN中CG心，对内脏痛可能具有中枢抑制作用。关键词降钙素基因相关肽；触液核；直结肠扩张；中脑导水管周围灰质；内脏痛本课题受2009年国家自然科学基金资助(基金号：30871307)徐州医学院硕士学位论文TheEffectsofCalcitoninGene—relatedPeptideinCerebro