用mes稀释液液态保存山羊精液果糖代谢的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文用MES稀释液液态保存山羊精液果糖代谢的研究姓名：高维强申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：谭景和；常仲乐20120614山东农业大学硕士学位论文’●‘●-●●．‘．中文摘要．．．‘．精液的冷冻保存是精液长期保存的有效方法，该技术在牛的精液保存已得到突破并实现商业化，牛冷冻精液的体外受精或人工输精可以获得理想受精率。但是山羊的精液冷冻效果却不理想，尽管解冻后活力可达30％以上，但受精率和妊娠率较低。因此延长山羊精液液态保存时间和提高山羊精液液态保存质量成为促进山羊人工授精技术推广应用的关键技术。我们在刘长河MES箩O黄包被液态保存山羊精液1

2、6天活力维持在30％以上的基础上，通过对母羊同期发情处理，分别用保存12、13、14、15、16天的精液人工输精，并对返情和妊娠情况进行记录。保存过程中精子存活时间和受精能力会受到许多因素的影响，例如离子成分、氧化应激、代谢性酸中毒、DNA断裂、精子质膜脂类和蛋白组分发生变化、顶体反应以及自发获能等，发现并消除这些不利因素，减少精液保存过程中精子受到的损伤，构建成分简单明确而又适宜精子体外存活的保存系统，将为精子代谢机理研究提供广阔空间。我们以山羊为试验动物，以MES、Nacl等构建了成分简单的pH6．25的MES稀释液，并在此基础上对液态保存过程中精子果糖代谢机理进行了研究，以

3、丰富“精子代谢机理”基础理论，为动物生产和医学临床提供理论依据。实验表明：(1)保存15、16天的精液用于输精不能达到预期效果，基本都返情：(2)保存12、13、14天的精液进行输精，这时的活力能在50％，这部分结果还没拿到。(3)在15℃条件下，精子既能维持4天的活力，又能保持一定强度的代谢活动，适宜我们研究代谢。(4)15℃保存时，稀释液中添加lOmM果糖效果最好，精子活力保持30％以上的保存时间能达到6d。而葡萄糖浓度超过10mM／L时，保存效果反而下降，精子活力保持30％以上的保存时间又逐渐缩短。(5)．15℃保存时，在含有果糖的稀释液中添加碘醋酸酯(Iodoacetat

4、e)阻断精子糖酵解途径，能显著降低精子活力，缩短精液保存时间(6)15"C保存时，在含有果糖的稀释液中添加脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone)●阻断精子磷酸戊糖途径，对精液保存时间和山羊精子活力有一定的影响。这还有待我们进一步进行研究确认。总之，通过本研究我们主要获得以下结论：1)保存15、16天的精液用于输精不能达到用MEs稀释液液态保存山羊精液果糖代谢的研究预期效果，基本都返情；2)15"C保存时添加果糖有利于山羊精子活力维持；3)15"C保存时，成分简单的MES中添加10mM／L的果糖保存效果最好，最有利于山羊精子存活，超过lOmM／I。开始对精子产生

5、不利影响：4)山羊精液液态保存过程中，山羊精子活力维持和对果糖的代谢利用依赖于糖酵解途径；5)山羊精液液态保存过程中，山羊精子活力维持和对果糖的代谢利用可能在一定程度上依赖于磷酸戊糖支路，但还有待进一步研究确定。关键词：山羊精液；液态保存；同期发情；人工输精；果糖代谢；代谢途径2山东农业人学硕二￡学位论文Fructosemetabolismandartificialinseminationofgoatsemenliquid-storedintheMESextenderabstractThebestwayforsemenstorageiscryopreservation，which

6、hasbeenusedforbullsemenstorageandartificialinseminationsuccessfully．Cryo-preservationofbullSemenhasbeencommercializedformanyyears．Howev日，thecryopreservationforgoatsemenisnotsuccessful．Althoughthemotilityofpost-thawSemenisupto30％，thefertilityrateandpregnancyratearemuchlowerthanthatoffreshsemen

7、．Itisnecessarytofmdalong-timeliquidstorageprotocolandimprovethequalityofliquidstorageatpresent，anditiscriticaltechnologyinexpandtheuseofartificialinsemination．OnThebasisofthemotilityofsemencoatedwithMESinpH6．25isupt0in16thday，weemploythesemen