偶联双基因靶点gnrs对tnbc放疗增敏作用与其机制分析

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1、上海交通大学硕士学位论文株MCF-7细胞为研究对象，利用MTT法及CCK-8法检测偶联双基因靶点多功能金纳米棒颗粒的细胞毒性；透射电子显微镜观察偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒进入细胞的情况；采用6MV-X线照射偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒温育后的肿瘤细胞，克隆形成实验检测细胞的放射敏感性改变；流式细胞仪分析细胞凋亡、细胞周期及整合素αvβ3表达水平的改变；Westernblot实验检测VEGFR的表达水平改变。结果1.采用种子诱导生长法合成均一的裸金纳米棒颗粒（GNRs），并通过表面包覆二氧化硅（SiO2）及表面聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)修饰，成功构建

2、偶联RGD及TKI-258双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）。2.透射电子显微镜显示偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒分散均一，表面硅层厚19.39nm+1.63nm，镜下可见介孔结构，并可通过细胞内吞作用进入MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞胞质内。紫外分光光度计检测多功能金纳米金棒颗粒吸收峰位于515、860nm处，偶联的双基因靶点抑制剂TKI-258、RGD分别在360、204nm处有特征性吸收峰。3.偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒在0-100μg/mL浓度范围内对MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的生物学活性无明显影响(p

3、>0.05)，细胞毒性评级为I级，IC50值434.63μg/mL。4.流式细胞仪检测细胞表面整合素αvβ3表达显示，相对于MCF-7细胞，放射可诱导MDA-MB-231细胞表面整合素αvβ3表达的上调，而通过联合多功能金纳米棒颗粒可有效阻断整合素αvβ3位点；Westernblot实验证明偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒可下调细胞表面VEGFR的表达水平。5.克隆形成实验证明在6MV-X线照射下金纳米棒颗粒（GNRs@mSiO2）可提高肿瘤细胞的放射敏感性，且多功能金纳米棒颗粒II万方数据上海交通大学硕士学位论文（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）放疗增敏作用更显著。同时细

4、胞凋亡实验亦显示偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒联合照射组的细胞凋亡率明显高于单纯纳米联合射线组(p<0.05)；而细胞周期检测提示多功能金纳米棒可使肿瘤细胞阻滞于放疗敏感的G2/M期。结论1.本课题成功设计并构建了偶联整合素αvβ3特异性结合肽RGD及VEGFR特异性抑制剂TKI-258双基因靶点的多功能放疗增敏金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）。2.该多功能金纳米棒颗粒可有效阻断肿瘤细胞固有或放射后诱导的整合素αvβ3表达，下调三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231异常高表达的VEGFR水平，更加显著地增加MDA-MB-231细胞的放射敏感性。这一增敏作用可能

5、与该多功能金纳米棒颗粒能够下调细胞αvβ3表达及将细胞阻滞在放射敏感的G2/M期有关。3.这一研究为多功能金纳米棒颗粒在TNBC放疗增敏的临床应用积累了一定的实验基础，有望提高TNBC的放射治疗疗效，但这一效应的具体机制还有待进一步研究。关键词：三阴性乳腺癌；多功能金纳米棒；放射治疗；整合素αvβ3；VEGFRIII万方数据上海交通大学硕士学位论文英文摘要Theimpactandmechanismofgoldnanoparticlesconjugatedwithdual-targetinhibitorsontheradiosensitivityoftriple-negativebreastc

6、ancercellBackground and purposeTriple negative breast cancer (TNBC)are defined as tumors that are negative for ER, progesterone receptor and HER‐2, which is a subtype characterized by its particular molecular profile and aggressive biological behavior.Multiple targets exist and play an important ro

7、le in the radiosensitivity regulation of TNBC.Strategies to improve radiosensitivity therefore to increase the efficacy of treatment has been a hot spot in translational radiotherapy research. In our study,