缺氧诱导心肌细胞凋亡中bcl-2、bax和nf-k b的表达及雌激素的作用

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1、北京协和医学院基础学院硕士学位论文硕士学位论文学校代码：10023学号：$2009254缺氧诱导心肌细胞凋亡中Bcl一2、Bax和NF．KB的表达及雌激素的作用所院：北京协和医学院基础学院姓名：王丹阳导师：朱广瑾研究员导师组：徐成丽研究员学科专业：病理学与病理生理学研究方向：心血管病理生理完成日期：二零一二年五月北京协和医学院基础学院硕士学位论文目录论文一缺氧诱导心肌细胞凋亡中Bcl一2、Bax和NF—KB的表达及雌激素的作用英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．⋯．．．．．。．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．2

2、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8实验结果⋯．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．．⋯．．．．⋯⋯．⋯．⋯⋯．．．．．．24讨论⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．⋯．．⋯．．．．．．⋯⋯33小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37论文二儿童青少年脂肪体重和去脂体重与肺通气功能的关系英文缩略词⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯44对象和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．

3、⋯⋯．．49讨{仑⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯58参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6lNF—KB在一些心血管疾病中的作用⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．65致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．74北京协和医学院基础学院硕士学位论文脲⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯⋯．⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．⋯．．75北京协和医学院基础学院硕士学位论文缩略词APS英文全称英文缩略词(Abbreviations)ammoniumpersulfateANOVAanalysisofvariancep—ME5．BrdUCADDEPCE，EREl订MAPKM

4、TTPAGEPBSPMSF[3-mercaptoethanol5-Bromo·-2·-Deoxyuridinecoronaryarterydisease中文全称过硫酸铵方差分析B-巯基乙醇5．溴尿苷冠心病diethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯l7p—Estradiolestrogenreceptor1713雌二醇雌激素受体estrogenreplacementtherapy雌激素替代疗法Mitogenactivatedproteinkinase有丝分裂原蛋白激酶Thiazolylblue噻唑蓝Polyacrylamidegelelectrophoresis

5、聚丙烯酰胺凝胶电泳phosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液phenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物Real—TimePCRRealtimepolymerasechainreaction实时多聚酶链式反应SDSsodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸钠TEMEDN，N，N’，N—tetramethylethylediamine四甲基乙二胺TrisTrihydroxymethylaminomethane三羟甲基氨基甲烷1北京协和医学院基础学院硕士学位论文中文摘要[目的]探讨缺氧诱导心肌细胞凋亡中Bcl一2、Bax和

6、NF—KB的表达，以及1713一雌二醇(En)对缺氧心肌细胞的保护作用。[方法]Sprague—Dawley大鼠乳鼠(出生卜2d)心肌细胞原代培养，待细胞生长良好时进行药物干预和缺氧刺激。将细胞分成四组，分别为Cl(对照组)、C2(单纯加药组)、H1(单纯缺氧组)和H2(加药缺氧组)。即C2、H2经E：作用24h，之后H1、H2缺氧(5％C0。+95％N：)处理12h，再进行统一处理。采用MTT法检测缺氧对心肌细胞活力和抑制率的影响及E：对缺氧心肌细胞的保护作用。采用Flowcytometry方法检测心肌细胞的凋亡。采用WesternBlot技术检测Bcl一2、Bax和

7、NF～KB的表达变化。采用Real-TimePCR技术分析Bcl一2mRNA和BaxmRNA水平的表达变化。[结果]缺氧使心肌细胞活力下降，且对心肌细胞生长产生抑制，10～、10～mol／LE：可以提高心肌细胞活力，逆转缺氧对心肌细胞生长的抑制作用。缺氧加重心肌细胞凋亡，使心肌细胞Bax蛋白、BaxmRNA、NF—KB蛋白的表达升高，Bcl一2蛋白、Bcl一2mRNA的表达降低，而经10～mol／L176一雌二醇预处理的缺氧心肌细胞较单纯缺氧组心肌细胞Bax蛋白、BaxmRNA、NF—KB蛋白的表达降低，Bcl一2蛋白、Bcl一2mRNA