aqp4、kir4.1、aqp9在脑局灶性缺血再灌注脑组织中的表达变化

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文第一部分脑局灶性缺血再灌注后AQP4与Kir4．1的再分布与脑水肿形成的关系摘要目的：研究大鼠脑局灶性缺血再灌注后水通道蛋白4(aquaporin4，AQP4)与内向整流性钾通道KiN．1(inwardlyrectifyingpotassium，Kir4．1)在脑组织中的表达变化，探讨两者在缺血再灌注性脑水肿形成过程中的作用。方法：119只SD雄性大鼠(250．3209)随机分为缺血再灌注(CIR)组与假手术对照组，采用线栓法制作大鼠CIR模型，缺血2h后拔栓实现再灌注，假手术组除不插线栓外，其余操作与CIR组相同

2、。于再灌注6h、12h、24h、48h、72h、7d取出大鼠脑组织，运用干湿重法、伊文氏蓝(EvansBlue，EB)；!贝U定法、免疫荧光双标和RT-PCR分别检测CIR后不同时间点脑水含量(brainwatercontent，BWC)、血脑屏障(bloodbrainbarrier，BBB)通透性、AQP4与Kir4．1两者mRNA的表达变化，并对每一时间点AQP4mRNA与Kir4．1mRNA表达量做比值分析。结果：缺血再灌注后6h，脑组织含水量即比假手术增加(p

3、后逐渐消退。EB含量在缺血缺血再灌注组各时间点均高于假手术组，并分别在12h与48h达到峰值，48h明显高于12h水平。荧光双标发现，随着再灌注时间的延长，AQP4与Kir4．1强弱不等地表达在双侧软脑1重庆医科大学硕士研究生学位论文膜、室管膜、脉络膜以及血管周围等与水代谢密切相关的界面上。RT-PCR结果显示：缺血再灌注后各组AQP4mRNA水平均较假手术组增高，且于再灌注72h达到峰值。kir4．1在再灌注早期表达降低，24h时间点后表达升高。再灌注后6-24h，AQP4与kir4．1比值升高，且明显高于假手术组，至24h两者比值达到峰值，

4、24h后两者比值逐渐降低，7d接近假手术组水平。结论：再灌注早期脑水肿主要由血脑屏障开放引起，而AQP4与kir4．1再分布造成的水电解质的失衡在中后期脑水肿的形成过程中发挥重要作用。关键词：脑缺血再灌注，水通道蛋白，钾通道，脑水肿重庆医科大学硕士研究生学位论文第二部分AQP9在缺血再灌注脑组织中的表达变化摘要目的：研究大鼠脑局灶性缺血再灌注(CerebralIschemiaReperfusionCIR)后脑组织中的水通道蛋白9(AQP9)的表达变化在缺血再灌注过程中的作用。方法：136只雄性SD大鼠(250—3209)随即分为CIR组与假手术

5、对照组，采用线栓法制作大鼠CIR模型，缺血两小时后拔栓实现再灌注，假手术对照组除不插线栓以外，其余操作与CIR组相同。在CIR后1h、3h、6h、12h、24h、48h、以及72h取出大鼠脑组织，运用HE染色、免疫组织化学法、RT-PCR分别检测CIR后脑组织病理变化以及不同时间点AQP9蛋白质及mRNA的表达变化。结果：免疫组织化学结果显示，CIR后AQP9在海马、皮质、脑室周围器官以及渗透压感受区表达增加。RT-PCR结果显示，CIR后lhAQPChnRNA表达升高，12h达到峰值。12h后，AQP9表达逐渐下降。结论：缺血再灌注早期(<1

6、2h)AQP9表达升高为保护性作用，后期表达下降可能与再灌注血液供应以及能量代谢恢复有关。关键词：脑缺血再灌注，AQP9PARToNETHERELATIoNSHIPBETWEENAQP4ANDKIR4．1REDISTRIBUTIoNANDBRAINEDEⅣIAAFTERCEREBRALISCHEMIAREPERFUSIoN．ABSTRACT0bjective：ThepurposeofthisstudywastoinvestigatethechangesofAQP4andKir4．1expressiontoexplorethemechanismo

7、fbrainedemaafterCIRMethods：119healthymaleadultSDrats(250—3209)weredividedinto2groupsrandomly，aCIRgroupandashamoperationcontrolgroup。CIRmodelwereestablishedbyoccludingunilateralmiddlecerebralarteryoftheratswithsuturemethod．thesutureswereremovedafter2hourstoallowreperfusion．Th

8、eoperationprocedureincontrolgroupwasthesameastheCIRgroupexceptoccludingunil