aqp4与kir4.1在大鼠眼内组织的共表达的论文

《aqp4与kir4.1在大鼠眼内组织的共表达的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、AQP4与Kir4.1在大鼠眼内组织的共表达的论文作者：陈海，孙善全，汪克建，陈通，谭戈，杨美【摘要】目的:探讨aqp4与kir4.1在大鼠眼内的定位分布及二者的共表达.方法:用免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微技术检测aqp4与kir4.1在大鼠眼内的分布.结果:免疫荧光显示，aqp4与kir4.1在大鼠视网膜和睫状体内的分布形式相似；免疫荧光双标显示，aqp4与kir4.1在视网膜müller细胞及睫状突无色素上皮细胞的顶膜面及基底膜面呈重叠分布.结论:aqp4与kir4.1在大鼠视网膜müller细

2、胞及睫状突无色素上皮细胞共表达，提示二者可能具有协同作用，参与房水的产生以及视网膜内水、k+运输平衡的调节.【关键词】睫状体/细胞学；视网膜；水通道蛋白；钾通道，内向整流；免疫荧光组织化学与荧光双标记0引言眼内水、电解质的运输平衡对维持眼的多项生理功能具有重要意义.但其异常的分子机制并不十分清楚.水通道蛋白（aquaporins,aqps）的发现及其在眼内的广泛分布开辟了探索眼内水、电解质运输平衡的新途径［1］.最近报道［2-3］，aqp4与kir4.1(in,kir)相耦联（coupling），在脑内

3、水、电解质运输平衡调节中发挥着重要作用.这种耦联关系与aqp4和kir4.1在某些胶质细胞特殊膜域的共表达（colocalization）有关［4］.本实验拟通过免疫组织化学和激光扫描共聚焦显微技术，对aqp4与kir4.1在眼内组织的定位分布及其共表达情况进行研究，为进一步探讨眼内水、电解质转运平衡及其调节机制提供形态学依据.1材料和方法1.1材料成年a公司；兔抗caqp4（碳端aqp4）购自美国chemicon公司；二抗(通用型免疫组化检测试剂盒)为中山生物技术有限公司产品；fitc标记羊抗兔i

4、gg,cy3标记羊抗兔igg等均购自武汉博士德生物试剂有限公司.1.2方法1．2．1眼组织准备用戊巴比妥钠（40mg/kg）经腹腔注射麻醉大鼠后，经左心室插管，用生理盐水将血液冲洗干净，再用40g/l多聚甲醛pbs溶液灌注固定30min.取眼球，于40g/l多聚甲醛pbs溶液后固定2h.用0.1mol/lpbs清洗组织，依次入50,100,150,200g/l蔗糖（0.1mol/lpbs配置）脱水，-20℃恒冷冰冻切片机矢状面连续切片，片厚为15μm.1.2.2免疫荧光组织化学方法切片经10mmol/l

5、pbs漂洗30min，3ml/l甲醇h2o2，10~15min，0.1mol/ltritonx100作用10min；正常山羊血清封闭4h，37℃，甩干不洗，加一抗aqp4或kir4.1(1∶400)，37℃孵育过夜，10mmol/lpbs漂洗15min×3次，二抗（fitc标记的羊抗兔igg或cy3标记的羊抗兔igg）90mim，37℃，0.01mpbs漂洗15min×3次；500ml/l甘油-10mmol/lpbs封片，激光共聚焦显微镜观察.1.2.3免疫荧光双标记试验10mmol/lpbs漂洗切

6、片30min，3ml/l甲醇-h2o2，10~15min，0.1mol/ltritonx100作用10min；正常山羊血清封闭4h，37℃，用aqp4一抗(1∶400)，37℃孵育过夜，10mmol/lpbs漂洗15min×3次，二抗(fitc标记的羊抗兔igg)90min，37℃，10mmol/lpbs漂洗15min×3次；正常山羊血清封闭4h，37℃，加另一抗kir4.1（1∶400），37℃孵育过夜，10mmol/lpbs漂洗15min×3次，二抗（cy3标记的羊抗兔igg）90min，37℃，

7、10mmol/lpbs漂洗15min×3次，500ml/l甘油-10mmol/lpbs封片，激光共聚焦显微镜观察.2结果2.1aqp4在大鼠眼内的分布aqp4阳性着色（绿色荧光）主要集中在视网膜神经层、睫状体无色素上皮细胞）以及角膜内皮细胞、晶状体上皮细胞和虹膜后色素上皮细胞（未显示），其分布主要集中在胞膜，胞质胞核未见显色（图1，2）.a:aqp4免疫荧光标记结果；b:kir4.1免疫荧光标记结果；c:a/b相应部位的正常形态结构扫描图；d:aqp4与kir4.1双重标记结果，呈黄色部位为二者的共表达

8、（onl:外核层，opl:外网状层，inl:内核层，ipl:内网状层，gcl:节细胞层；:阳性着色的müller细胞或星形胶质细胞胞体，→:müller等胶质细胞突起，:血管周围，↓:内界膜，→:感光细胞外节）.图1激光共聚焦显微镜下正常大鼠视网膜aqp4（绿色）与kir4.1（红色）免疫荧光标记结果×4002.2kir4.1在大鼠眼内的分布kir4.1在正常大鼠视网膜内呈明显的阳性表达，尤其是在小血管周围和内界膜等处的表达较强，其分布