loxl1和cblc在肝癌组织中异常表达的研究

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1、●■t学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：兰狱红日期：矽／三年f月乙细摘要LOXLI和CBLC在肝癌

2、组织中异常表达的研究研究生兰秋红导师杨玉秀教授郑州大学第一附属医院，消化内科河南郑州450052摘要原发性肝癌(primarylivercancer，PLC)是常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率有上升趋势，居全球恶性肿瘤第5位，每年新发病患者约62．2万例，死亡率居恶性肿瘤第3位，在我国，新发病患者约34万例／年，近11万人／年死于肝癌，在肿瘤相关死亡中居第2位【1’21。该病多见于中年男性，男女比例为2～5：l。PLC有三种病理学类型，即肝细胞癌(HepatocellularCarcinoma，HCC)、肝内胆管细胞癌(Intrahepa

3、ticcholangiocarcinoma，ICC)、肝细胞癌．肝内胆管细胞癌混合型，其中HCC居多，占90％以上。肝癌的病因根据地域的不同略有差异，在亚非地区约80％的HCC患者合并HBV或HCV感染，而欧美地区HCV感染及酒精性肝硬化为其主要致病原因。HCC的地域性分布还与食用黄曲霉毒素污染的食物、饮用含有藻类毒素的池塘水有关。此外，遗传、药物、寄生虫(华支睾吸虫、血吸虫等)、细菌感染等因素办可能与HCC相关，这些因素能直接或间接的改变细胞的生长调控，导致细胞增生异常，引发肝癌。由于肝癌发生、发展隐匿，早期缺乏典型临床症状，一旦确诊，

4、多已进入中晚期，仅有10％．30％的病人能行肿瘤切除治疗，且其术后5年生存率约为30％．60％，复发率约为80％【31，局部治疗转移、复发率更高，严重威胁病人的生命及生存质量。因此早期诊断与有效的治疗尤为重要，目前临床上应用广泛的诊断肝癌的血清肿瘤标志物为AFP，其阳性率仅为60％-70％，且妊娠、肝病活动期和生殖腺胚胎瘤时AFP表达亦可升高。因此寻找新的有效的肿瘤标志物及分子治疗靶点意义重大。类赖氨酰氧化酶l(Lysyloxidase．1ikel，LOXLl)位于人染色体15q22，分布于弹性纤维存在的组织，参与局部组织中弹性蛋白的合成

5、，也是弹性纤维摘要发育成熟和保持内环境稳定的关键酶，在形成和维护细胞外基质结构中必不可少【4JoCBLC(Cas-Br-M(murine)eeotropicretroviraltransformingsequencec)属于RING型泛素连接酶E3，是泛素蛋白酶／溶酶体降解通路中的关键因子，对由泛素化引起的膜受体及下游信号传导分子在细胞内的降解过程中发挥重要作用，能够负调控细胞内信号传导【5’6】。本研究分别应用逆转录聚合酶链式反应(ImPcR)和蛋白免疫印迹实验(WesternBlot)方法检测人正常肝脏组织、肝硬化组织和肝癌组织中LO

6、XLl、CBLC基因及蛋白表达水平的差异，并应用免疫组织化学(Immunohistochemistry)方法检测分析LOXLl蛋白表达与肝癌分化及病理分级之间的关系。1．材料与方法1．1材料标本均取自2010年3月～2010年5月在河南省人民医院肝胆外科行肝脏手术者，诊断均经病理证实。共88例，其中23例人正常肝脏组织，取自于肝血管瘤病变部位的周围组织；22例肝硬化组织取自于门静脉高压行贲门周围血管离断术并行病理检查者；43例HCC组织，取自于HCC手术切除标本。正常肝脏组织HBsAg阴性，肝硬化组织、HCC组织HBsAg均阳性。所取组织

7、标本新鲜，并经患者知情同意。1．2方法1．2．1RT-PCR：分别提取人正常肝脏组织、肝硬化组织和HCC组织中的IⅢA；测定总RNA吸光度A260／A280值，衡量其纯度和完整性；按RT-PCR试剂盒要求步骤进行反转录PCR，扩增产物用2％的琼脂糖凝胶电泳鉴定，并行扫描和半定量分析。1．2．2Westernblot检测：提取总蛋白后等浓度上样。Tricine．SDS．PAGE电泳分离蛋白后，转膜，一抗稀释液(LOXLll：750；CBLC1：600)孵育，辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗稀释液(1：1000)孵育，ECL化学发光与曝光显

8、影，并行半定量分析。1．2．3免疫组织化学：各组标本均行常规HE染色，经病理学分级，采用免疫组化SP法检测，染色步骤按说明书进行，拍照并储存照片。ll摘要1．3统计学处理：应用SPSSl7．0