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时间:2019-02-02
《枯草杆菌血栓溶解酶的液体发酵与分子修饰研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要本论文以稻草中分离的枯草杆菌SBS为出发菌株,以枯草杆菌血栓溶解酶(BacillusThrombolytieenzyme,以下简称BTE)为研究对象,研究了BTE产生的液体发酵工艺以及BTE的分离和纯化并对BTE分子进行了聚乙二醇(PEG)化修饰,以期改进其酶学性质,为今后的应用奠定基础。结果表明:通过正交实验得出的最优培养基组成(g/L):燕麦麸皮7,可溶性淀粉3,大豆分离蛋白25,CaCl20.2。采用优化后的培养基进行了15L发酵罐的发酵试验,菌种种龄lOh,接种量5%,通气搅拌,温度37℃,初始pH8.0,发酵70h后BTE酶活力达到542IU/
2、mL。BTE分离和纯化方法的研究结果表明:发酵液经过25%.70%硫酸铵分级沉淀、DEAE.52阴离子交换色谱和SephadexG75凝胶过滤色谱等步骤,得到BTE纯酶,回收率为80.66%,纯化倍数为12.27,比活达到11854IU/mg。该酶经SDS.PAGE湿示为单一电泳带,分子量为32KDa。经Fibrin.SDS—PAGE电泳检验,料酶溶液中只有分子量为32KDa的枯草杆菌血栓溶解酶具有溶解血纤维蛋白的能力。合成了以谷氨酸为中心分子的分枝型PEG修饰剂对BTE进行了定点修饰。实验结果显示修饰后酶的活力急剧下降,SDS.PAGE图谱条带模糊,没有达
3、到预期的效果。关键词:枯草杆菌血栓溶解酶;液体发酵:分离纯化;分枝型修饰剂;PEG修饰ABSTRACTTheoptimumliquidfermentationtechnology,isolationandpurificationaswellaspegylationofBacillusThrombolyticenzyme(BTE)producedbyBacillussubtil括SBSscreenedfromricestrawwerestudiedinthispaper.TheaimofBTEpegylationwastoimproveitscharacter
4、isticsandgivesomebasisforapplicationinthefuture.111eresultSshowedthattheoptimalfermentationtechnologywereasfollows(g/L):oatbran7,solublestarch3,soybeanisolateprotein25,CaCl20.2,naturalpH8.0at37"Cwithinoculationage10h.inoculationvolume5%.Undertheaboveconditionstheliquidculturewascar
5、riedoutfor70hin15Lbioreactor,TheactivityofBTEamountedto542IU/mL.TheisolationandpurificationoftheBTEwerestudiedusingammoniumsulfatefractionprecipitationandion·-exchangechromatographyonDEAE·-52andSephadexG75gelfiltration.ThespecificactivityofpurifiedBTEwas1l854IU/mL,andpufificmionfol
6、dwas12.27andayieldof80.66%.SDS—PAGEdisplayedonlyoneband,andthemolecularweightofBTEwasestimatedtobe32KDa.Fibrin-SDS-PAGEshowedonly32KDaproteinhadthethrombolyticability.Site-directedpegylationmodificationofBTEWasstudiedwimbranchedPEGsynthesizedwithglutamicacidasthecentralmolecule.The
7、resultsindicatedthatBTEactivitydecreasedrapidly,SDS-PAGEbandblurred,80theaimnotrealized.Keywords:Bacillussubtilisthrombolyticenzyme,liquidculture,separationandpurification,branchedPEG,PEGylation,天津科技大学硕士学位论文1前言1.1我国农副产品加工废弃物利用现状我国是一个农业大国,近年来,随着农业经济的发展,农作物产量不断提高,农副产品加工废弃物数量也呈上升趋势,特别
8、是农民生活水平的改善,对可用作燃料和肥料的农副产品加
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