稻瘟菌fj95054b菌株无毒基因的遗传分析及其bac文库的构建

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名：翩三日期：7呻z多．，≯论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复

2、制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。口不保密，本论文属于不保密。d学位(毕业)论文作者亲笔签名：每}碜乞日期：y一，·，．，≯指导教师亲笔签名；日期：2．．一‘．‘．，P福建农林大学硕士学位论文摘要子囊菌稻瘟病菌Magnaporthegrisea(无性Pyriculariagrisea)引起的稻瘟病是世界上最重要的水稻病害之一。目前。利用抗病品种是控制该病最经济、最有效的措施，但是，由于其遗传上的多样性与复杂性，稻瘟病菌很快地便会克服寄主的抗性。而稻瘟病菌有性世代的发现及利用，为从分子水平研究该病菌的致病相关因子的遗传、变异及致病相关基因的克隆、功能研究

3、提供了良好的试验材料。本研究利用FJ95054B与GUYll交配，建立一个随机后代群体，并进行有性后代的遗传分析，同时利用FJ95054B构建了～个稻瘟病菌的BAC文库。本研究首先对FJ95054B与GUYll这两个亲本菌株进行毒性分析。将FJ95054B与GUYll接种在己知抗性基因的24个IRBL系列与9个日本的水稻品种上，结果表明，FJ95054B只对这33个品种中的3个有毒，而GUYll对26个品种有毒。而且FJ95054B与GUYl1只在6个品种上的致病类型一致。可见，这两个菌株之间的毒性存在着较大的差异。利用已知含单一抗性基因的C101LACPi—l(t

4、)，C10tA51Pi-2(0，C104PKTPi-3(0，C101PKTPi-4a，C105PPT-4L-23Pi-4b和C039近等基因系品种对这两个菌株进行毒性分析的结果表明，FJ95054B含Avr-Pil，Avr-Pi2和Avr-Pi4a等无毒基因，而GUYll只含Avr-Pi4b无毒基因。对FJ95054B与GUYll交配产生的79个有性后代进行毒性分析的结果表明，后代在C101LACPi-1(t)，C101A51Pi．2(t)和C101PKTPi．4a上的无毒、有毒分离比例符合1：1，有6个后代个体发生了这三个无毒位点的重组。因此，推断FJ95054B

5、对这三个品种的无毒性由三个不同的单一位点控制，且三个位点紧密连锁。而有性后代在C105PPT-4L．23Pi．．4b的无毒性、毒性后代分离比例符合3：1的期望值。图位克隆是克隆无毒基因的一种主要方法，而基因组文库一一尤其是BAC文库又是图位基因克隆的一个关键性技术平台。在本研究中，稻瘟菌菌株FJ95054B经提取纯化得到其基因组DNA，用限制性内切酶HindIII部分酶切后，采用两种方法(13．琼脂糖酶消化及利用电洗脱仪洗脱)回收大片段DNA，与载体CopyControlpCClBAC按10：l比例相互连接，转化TransforMaxEPl300Ecoli感受态细胞

6、，通过蓝白斑筛选挑取白色克隆从而构建了FJ95054B菌株的稻福建农林大学硕士学位论文瘟病菌细菌人工染色体(BAC)基因组文库。通过酶切检测对所构建的BAC文库进行鉴定。经统计，该文库含有8064克隆，平均插入片段为78kb，覆盖了18倍稻瘟病菌基因组。研究结果还发现，采用B．琼脂糖酶消化及利用电洗脱仪洗脱大片段DNA这两种方法回收大片段DNA，经连接、转化后得到的克隆，其插入片段分别是70kb与95kb。关键词：稻瘟病菌无毒基因BAC文库福建农林大学硕士学位论文AbstractTheascomycetousfungusMagnaporthegrisea(anamo

7、rph咖iculariagrisea)causesriceblast,oneofthemostimportantdiseasesofrice．Formostdee-growingareas，riceblastdiseasemanagementreliesonthefrequentapplicationofnewresistantricecultivars．However，M．griseaisabletorapidlyovercomehostresistancebecauseofitsgeneticdiversityandcomplexy．Andthesexual