分子机制的研究

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1、华中科技大学博士学位论文胰腺癌干细胞分离扩增及其耐药特性和分子机制的研究中文摘要第一部分胰腺癌干细胞的分离、鉴定目的自胰腺癌移植瘤和细胞系中检测、分选胰腺癌干细胞为后续研究打下基础。方法建立裸鼠移植瘤模型，纯化胰腺癌肿瘤组织。流式细胞技术检测CD24、CD44和ESA在胰腺癌移植瘤和细胞系PANC-1、SW1990、PC3和BXPC-3中的表达率。+++分选胰腺癌移植瘤和细胞系SW1990CD24CD44ESA细胞，NOD/SCID小鼠移植瘤实验检测其成瘤特性、自我更新和分化等肿瘤干细胞样特性。结

2、果成功建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型，移植瘤组织类型和原代肿瘤相似，并能纯+++化胰腺癌细胞。胰腺癌移植瘤中CD24CD44ESA平均表达率为0.8%，胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PC3和BXPC-3平均表达率分别为2.3%、3.6%、1.8%和83.4%。+++自胰腺癌移植瘤和细胞系SW1990中分选到CD24CD44ESA细胞，纯度>90%。3+++NOD/SCID鼠移植瘤试验证明，10个CD24CD44ESA胰腺癌细胞就能成瘤（移植+++瘤胰腺癌中8/9，细胞系SW1990中9/9）

3、，而阴性细胞不能成瘤；CD24CD44ESA胰腺癌细胞能复制表型一样的自我，并分化出其它阴性细胞，具有一定的自我更新和分化能力。结论自胰腺癌移植瘤和细胞系SW1990中成功分选、鉴定到胰腺癌干细胞，为胰腺癌干细胞生物学特性和分子机制研究打下基础。关键词:胰腺癌，干细胞，CD24，CD44，ESA，流式细胞术第二部分胰腺癌干细胞体外扩增及其对吉西他滨耐药特性的研究目的体外培养、扩增胰腺癌干细胞；探讨胰腺癌干细胞对吉西他滨的药物敏感性。方法采用无血清条件培养基体外培养、扩增胰腺癌干细胞，形成微球后加入

4、含血清I华中科技大学博士学位论文培养基诱导分化。显微镜观察其生长情况，流式细胞仪检测胰腺癌干细胞表达率的变化。运用吉西他滨干预胰腺癌移植瘤和细胞系SW1990，建立耐药胰腺癌细胞株，流式细胞术检测耐药细胞中胰腺癌干细胞的表达率。吉西他滨干预分选好的胰腺癌干细胞和非干细胞，检测其凋亡率变化情况。结果在体外无血清条件培养基培养下，胰腺癌干细胞呈癌微球样生长，其+++CD24CD44ESA细胞>60%；更换含血清培养基培养后，微球贴壁生长，胰腺癌干细胞表达率降低到<5%。胰腺癌细胞系SW1990经吉西他

5、滨体外诱导后，胰腺癌干细胞平均表达率由3.6%升高为42.6%；移植瘤经吉西他滨体外干预后胰腺癌干细胞平均表达率由0.8%升高为32.67%。吉西他滨体外干预后，原代胰腺癌干细胞和非干细胞凋亡率分别为21.7±3.5%和40.2±5.3%；SW1990中胰腺癌干细胞和非干细胞凋亡率分别为14.3±4.1%和24.6±4.6%。结论胰腺癌干细胞能在体外短暂扩增、培养，其对吉西他滨较非胰腺癌干细胞显著耐药，是胰腺癌中的耐药核心细胞。关键词胰腺癌，干细胞，无血清条件培养基，多药耐药第三部分胰腺癌干细胞特

6、异性表达谱基因和microRNA的筛选目的基因芯片筛选胰腺癌干细胞特异性表达谱基因和microRNA，初步阐明胰腺癌干细胞耐药的分子机制。方法提取胰腺癌干细胞和非干细胞总RNA和microRNA，采用全人类表达谱芯片AffymetrixU133plus2.0和Agilent10.0microRNA芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选，并进行GO分析和信号通路分析。分离提取吉西他滨干预后的耐药胰腺癌细胞和普通胰腺癌细胞的总RNA和microRNA，全人类表达谱芯片AffymetrixU133

7、plus2.0和Agilent10.0microRNA芯片筛选耐药和普通胰腺癌细胞中的差异基因。对比胰腺癌干细胞和耐药胰腺癌细胞中的共同变化基因，明确胰腺癌干细胞中耐药的关键基因位点。结果表达谱芯片筛选到原代和细胞系SW19900胰腺癌干细胞公共差异表达基因820II华中科技大学博士学位论文条，其中胰腺癌干细胞中上调表达281个，下调表达539个。GO分析提示差异基因进行涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞结构、代谢等多个环节。还涉及TGFbR，apoptosis，p38MAPK，和EGFR1等多条关键信

8、号通路。和耐药胰腺癌细胞差异基因对比，共有25条表达谱公共差异基因，其中23条上升表达，2条下降表达。microRNA芯片筛选出14条差异基因，胰腺癌干细胞中上调表达8个，下调表达6个。结论筛选到胰腺癌干细胞特异性表达谱基因和microRNA，和耐药胰腺癌细胞对比发现多条基因和胰腺癌耐药相关，为胰腺癌干细胞耐药机制的阐明打下基础。关键词:胰腺癌，干细胞，基因芯片，microRNA，信号通路III华中科技大学博士学位论文IsolationandPropagationofPancrea