【5A版】植物组织培养培养基及操作技术.ppt

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1、第三章培养基及一般培养技术（4学时）3.1培养基的种类和成份（1学时）3.2培养基的制备（母液的配制和保存；MS培养基的配制）（融入实验课）；一般操作技术（灭菌、接种、培养、移栽驯化）（2学时）3.3组培常见问题与对策（污染、褐化、玻璃化）（1学时）第一节培养基的成分和种类一、培养基的成分培养基组成无机营养物有机营养物植物生长调节剂碳水化合物其它添加物1、无机营养元素(inorganicelement)1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。[N、P、K、Mg、S和Ca等]。2)微量元素：指小于

2、0.5mmol／L的元素。[Fe，B，Mn，Cu，Mo，Cl等]。在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。种类：VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、VH(生物素)、VB11(叶酸)、VB12（钴胺素)等。使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。2、维生素(vitamin)又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。使用浓度：一般为lOOmg／L，作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的

3、形成也有作用。3、肌醇培养基及其配制作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。使用浓度：为10—200mg／L。4、氨基酸(aminoacid）培养基及其配制5、有机附加物（天然复合物）10%—20%150-200ml／L150—200g／L0.01%-0.05%浓度：培养基及其配制有机附加物椰乳香蕉马铃薯酵母提取液6、植物生长调节物质(hormone)赤霉素（gibberellicacid）细胞分裂素类(cytok

4、inin)生长素类(auxin)培养基及其配制*作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5—10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。（1）生长素类培养基及其配制吲哚乙酸：IAA（indoaceticacid）萘乙酸：NAA（naphthaleneaceticacid）吲哚丁酸：IBA（indolebutyricacid）2,4-二氯苯氧乙酸：2,4—D(2,4-dichlorophenoxybutyricac

5、id)生长素种类：培养基及其配制生长素作用强弱顺序：IAA(吲哚乙酸)NAA(萘乙酸)IBA(吲哚丁酸)2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)强弱培养基及其配制种类：6—BA(6—苄基腺嘌呤)Kt(kinetin激动素)Zt(zeatin玉米素)（2）细胞分裂素类细胞分裂素作用：①促进细胞分裂与扩大。②诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。③抑制根的分化。培养基及其配制细胞分裂素作用强弱顺序Kt(激动素)6—BA(6—苄基腺嘌呤)Zt(玉米素)强弱培养基及其配制GA3（赤霉酸）：作用：促进幼芽伸长生

6、长，促进不定胚发育成小植株。赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。（3）赤霉素培养基及其配制7、培养材料的支持物---琼脂(agar)固体培养时最好的固化剂。用量：6—10g／L。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过

7、碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。培养基及其配制固体培养基的特点（与液体培养基相比）:优点:操作简便，通气问题易解决，便于观察研究。缺点:培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分充分利用，同时培养物排出的代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。固体培养液体培养培养基及其配制8、抗生物质(antibiotic)种类：卡那霉素、头孢霉素、青霉素、链霉素、庆大霉素等。浓度：5—20mg/L。作用：可防止菌类污染。培养基及其配

8、制9、活性炭(activecarbon)目的：是利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响；利于生根。使用浓度：1—5g／L。它的颗粒大小决定着吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；温度低吸附力强，温度高吸附力减弱，甚至不吸附。培养基及其配制10、水（water)作用：是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。注意：用蒸馏水，最好是重蒸馏水；以保持培养基成分的精确性。大规模生产时可用自来水。培养基及其配制二、培养基的PH