SNT2440-2010-进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱-串联质谱法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４４０—２０１０进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱串联质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮犪犳犳犲犻狀犲犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４４０—２０１０前言本标准的附录Ａ、附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要

2、起草人：王美玲、王鹏、魏颖、陈笑梅、戴华。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４４０—２０１０进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱串联质谱法１范围本方法规定了蜂王浆中咖啡因含量液相色谱串联质谱法的测定方法。本方法适用进出口蜂王浆中咖啡因含量测定的制样和测定方法。２方法提要试样中的咖啡因用水提取，沉淀蛋白质后，经Ｃ１８固相萃取小柱净化，液相色谱质谱／质谱法测定，外标法定量。３试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。３．１乙腈：高效液相色谱级。３．２甲醇：高效液相色谱级。３．３甲酸：

3、优级纯。３．４乙酸铅。３．５草酸钾。www.bzfxw.com３．６磷酸氢二钠。３．７２０％乙酸铅溶液：取２０ｇ乙酸铅，溶解水中并定容至１００ｍＬ。３．８草酸钾磷酸氢二钠溶液：取草酸钾３ｇ，磷酸氢二钠７ｇ，加入１００ｍＬ水溶解。３．９２０％甲醇水溶液：取２０ｍＬ甲醇用水定容到１００ｍＬ。３．１０６０％甲醇水溶液：取６０ｍＬ甲醇用水定容到１００ｍＬ。３．１１０．１％甲酸溶液：准确取１ｍＬ甲酸用水定容到１０００ｍＬ。３．１２咖啡因（ｃａｆｆｅｉｎｅ，Ｃ８Ｈ１０Ｎ４Ｏ２，ＣＡＳ编号５７４３１２４，相对分子质量１９４．１９）：纯度大于等于９９．８％。３．１３标准储备溶液：准

4、确称取适量咖啡因标准品，用水溶解配成１００μｇ／ｍＬ的标准溶液，４℃避光保存，本标准溶液在半年内稳定。３．１４标准工作溶液：临用时用６０％甲醇水溶液将标准储备溶液稀释成含咖啡因５μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、５０μｇ／Ｌ、１００μｇ／Ｌ、５００μｇ／Ｌ的标准工作溶液。３．１５固相萃取柱：Ｃ１８固相萃取小柱（２５０ｍｇ，３ｍＬ）或相当者。使用前用５ｍＬ甲醇和５ｍＬ水预洗。３．１６０．４５μｍ滤膜，有机系。４仪器和设备４．１高效液相色谱四极杆串联质谱联用仪：配电喷雾（ＥＳＩ）离子源。４．２离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．３涡旋混匀器：２００ｒ／ｍｉｎ～２４０００ｒ／ｍｉｎ可调。４

5、．４超声波清洗器。４．５天平，感量为０．００１ｇ、０．０００１ｇ。１犛犖／犜２４４０—２０１０５试样制备和保存取代表性样品约５００ｇ，将其用力搅拌均匀，装入洁净容器内，密封，并标明标记，于－１８℃以下保存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生所测物质量的变化。６测定步骤６．１提取和净化准确１ｇ（准确到０．００１ｇ）混合均匀的样品于５０ｍＬ离心管中，加入２０ｍＬ水，于超声波清洗器上超声１５ｍｉｎ，冷却后加入２．５ｍＬ乙酸铅溶液，２．５ｍＬ草酸钾磷酸氢二钠溶液，涡旋混匀器上混匀，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，取上清液过Ｃ１８固相萃取柱，以１滴／ｓ洗脱速度，用５ｍＬ水

6、、５ｍＬ２０％甲醇水淋洗后，负压抽干，用２．０ｍＬ６０％甲醇水溶液洗脱并收集并定容至２．０ｍＬ，混匀后，过０．４５μｍ滤膜，供液相色谱质谱／质谱法测定。６．２测定６．２．１液相色谱四极杆串联质谱条件ａ）色谱柱：Ｃ１８色谱柱（４．６×１５０ｍｍ，５μｍ）或相当者；ｂ）柱温：４０℃；ｃ）流动相和洗脱程序见表１；流速：０．５０ｍＬ／ｍｉｎ；表１流动相和洗脱程序时间／ｍｉｎ０．１％甲酸／％乙腈／％０．００９８．０２．０３．００www.bzfxw.com９８．０２．０８．００３０．０７０．０１２．００３０．０７０．０１２．０１９８．０２．０２０．００９８．０２．０ｄ）进样量：１

7、０μＬ；ｅ）离子源：电喷雾，正离子；ｆ）扫描方式：多反应监测（ＭＲＭ）；ｇ）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气或其他高纯气体；监测离子对（ｍ／ｚ）和其他参考条件见附录Ａ表Ａ．１。６．２．２犔犆犕犛／犕犛测定根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准校正溶液，试液中待测物的响应值应在仪器检测的线性范围内。校正溶液及样液等体积进样测定，在上述色谱条件下，咖啡因的保留时间分别约为１２．７ｍｉｎ，标准的提取离子质谱图见附录Ｂ中的图Ｂ．１。外标法定量。６．２．３液相色谱质谱确证在上述液相色谱串联质谱条件下进行测定，试液中待