SNT2062-2008-进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０６２—２００８进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犪犮狉狅犾犻犱犲犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２０６２—２００８前言本标准的附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：谢文

2、、丁慧瑛、奚君阳、钱艳、陈笑梅、黄雷芳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２０６２—２００８进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法１范围本标准规定了蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的检测。２方法提要样品用甲醇沉淀蛋白质，在磷酸盐缓冲盐溶液介质下，再用Ｃ固相萃取小柱净化，液相色谱串联１８质谱测定，外标法定量。３试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3、３．１乙腈：高效液相色谱级。３．２甲醇：高效液相色谱级。３．３甲酸：高效液相色谱级。３．４氢氧化钠。３．５磷酸二氢钠。３．６０．１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４ｇ氢氧化钠，并用水稀释至１Ｌ。３．７甲醇水溶液：甲醇水（２＋８，体积比）。３．８磷酸盐缓冲溶液：溶解１３．８ｇ磷酸二氢钠于９５０ｍＬ水中，用０．１ｍｏＬ／Ｌ氢氧化钠溶液调节溶液ｐＨ值到８．０，最后用水稀释至１Ｌ。３．９螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素磷酸盐、泰乐菌素酒石酸盐、红霉素、罗红霉素、交沙霉素标准品：纯度大于等于９５％，参见附录Ａ表Ａ．１。３．１０７种大环内酯标准储备溶液：称取适量标准品（３．９），分别用甲醇溶解，溶液

4、浓度为１００μｇ／ｍＬ，１℃～４℃冰箱保存。有效期三个月。３．１１标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成２．５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ的混合标准工作溶液，相当于样品中含有５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ大环内酯。３．１２Ｃ１８固相萃取小柱，５００ｍｇ或相当者，使用前依次用５ｍＬ甲醇，５ｍＬ水预洗。４仪器和设备４．１高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。４．２旋转蒸发器。４．３固相萃取装置。４．４高速离心机：７０００ｒ／ｍｉｎ。４．５ｐＨ计。１犛犖／犜２０６２—２０

5、０８４．６旋涡混合器。４．７氮吹仪。５试样制备与保存取５００ｇ代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在－１８℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。６测定步骤６．１提取称取２ｇ试样（精确到０．０１ｇ）置于５０ｍＬ具塞离心管中，加５ｍＬ水，混匀，静置５ｍｉｎ，再加甲醇至１０．０ｍＬ，于旋涡混合器上以２０００ｒ／ｍｉｎ混匀１ｍｉｎ，于６０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，过滤，移取５．０ｍＬ滤液，加１５ｍＬ磷酸盐缓冲溶液（３．８）稀释，混匀。６．２净化将溶液转移至固相萃取小柱

6、中（３．１２），再用５ｍＬ水和５ｍＬ甲醇水溶液（３．７）依次洗涤浓缩瓶，洗涤液过固相萃取小柱，弃去流出液，在负压下抽干，用６ｍＬ甲醇洗脱，控制流速１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集全部洗脱液于１０ｍＬ离心管中，洗脱液在５０℃以下水浴下平缓氮气吹至约１ｍＬ，用水定容至２．０ｍＬ，混匀，溶液过０．４５μｍ，滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。６．３测定６．３．１液相色谱串联质谱条件ａ）色谱柱：Ｃ８柱，５μｍ，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径）或相当者：ｂ）流动相梯度洗脱程序（见表１）；表１梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ乙腈／％０．１５％甲酸水溶液／％０２０８０２２０８０７．５８０２０７．６９５

7、５８．７９５５８．８２０８０１４２０８０ｃ）流速：４００μＬ／ｍｉｎ；ｄ）进样量：２０μＬ；ｅ）离子源：电喷雾离子源；ｆ）扫描方式：正离子扫描：ｇ）检测方式：多反应监测；ｈ）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录Ｂ表Ｂ．１；ｉ）监测离子对（ｍ／ｚ）：螺旋霉素８４３．６／１７４．３（定量离子）、８４３．６／３１８．５；替米考星８６９．７／１７４．４（定量离子）、８６９．７／１５６．６；竹桃霉素６８８．６／