补肾活血法与益气补血法防治化疗后骨髓抑制与作用机制比较分析

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1、军医进修学院硕士学位论文三七等15’7j，在防治化疗后骨髓抑制和促进骨髓造血方面具有良好的效果。导师长期从事中西医结合肿瘤临床工作，体会到肾虚和血瘀是肿瘤化疗后骨髓抑制的重要因素，并根据中医学理论及现代药理学研究成果，在传统益气补血基础上，加用补肾活血法，防治化疗后骨髓抑制取得了良好的效果。为创新中药配伍方案、提高临床疗效提供科学依据，本课题在2010----2012年度国家自然科学基金支持下，对补肾活血法与益气补血法两组中药对肿瘤化疗后骨髓抑制的防治作用，及其相关作用机制进行了比较研究。8军医进修学院硕士学位论文材料、方法及结果1材料1

2、．1动物ICR小鼠160只，SPF级，体重(20士29)雌雄各半，由军事医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(军)2007--004，设施合格证号：SYXK(军)2007--004。1．2药物及制备、产地、生产厂家、批号补肾活血方由熟地159(河南)、何首乌159(河南)、枸杞子159(宁夏)、川芎159(四川)、丹参159(山东)组成。益气补血方由炙黄芪209(内蒙古)、当归109(甘肃)、鸡血藤159(广西)、党参159(山西)、自芍159(浙江)组成。以上药物均购自解放军总医院中药房，经鉴定后，煎煮2次、过滤、旋转蒸发

3、、浓缩、配制成含生药lg／ml的药液，4"C低温保存备用。1．3试剂及生产厂家、批号(1)注射用环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，产品批号11062121，规格0．29。(2)AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒，南京凯基生物技术有限公司生产，生产批号：20100813。(3)MouseGM．CSFELISA试剂盒，武汉博士德公司，生产批号：2R631。(4)FITC标记的大鼠抗小鼠CD34抗体及对照抗体，美国BectonDicikinson公司。生产批号：80101．1．4仪器及其型号、生产厂家(1)全自动多功能

4、酶标仪：Bio．Rad680酶标仪，美国。(2)电热恒温培养箱：DH4000A，天津泰斯特。(3)MINIshaker点动振荡器：MH．1，kylin-BellLabInsU'uments，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司。(4)半自动洗板机：Wegwash4Mk2，Thermo，美国。(5)低温离心机，Labofuge400R型，Heraeus公司。(6)离心机(LDZ4-1．2)，北京京力离心机有限公司。9军医进修学院硕士学位论文(7)光学显微镜：OLYMPUS，日本。(8)自动血细胞计数仪：Sysmex-820，日本。(9)流式细胞

5、仪：CytomicsFC500BeckmanCoulter。(10)升降恒温水油浴锅：巩义市予华仪器有限责任公司。(11)电子精密天平：德国SartoriusBSllOS。(12)纯水器：美国MILLIPORESknplicity。2方法2．1动物分组将小鼠按体重从大到小随机分为4组，空白组、模型组、补肾活血组、益气补血组，每组40只，雌雄各半。2．2给药剂量、时间及方法各组小鼠常规饲养3天，观察无异常者入组并开始灌胃给药，给药剂量参照文献【8】计算补肾活血组和益气补血组小鼠的等效剂量为0．3ml／209／d，根据小鼠不同体重，计算小鼠灌

6、胃量，每日上午8时至9时灌胃，连续灌胃给药16天；空白组和模型组分别给予等体积的生理盐水。2．3造模灌胃给药第8天，参照文献方法19]模型组、补肾活血组和益气补血组给予腹腔注入环磷酰胺溶液(100mg-kgI．d。)，每天1次，连续3天。2．4观察指标和时问、标本取材、处理及指标的测定方法(1)动物一般情况：每日观察精神、饮食、活动、毛发、大便等。(2)外周血血常规每组随机抽取10只小鼠，于造模前1天及造模完成后的第l、4、7、ll、14、17、21天，将小鼠固定于小鼠固定器，酒精棉球擦净尾静脉，干棉球擦净酒精，刀片划破尾静脉用刻度滴管采

7、血，每只采血0．2ml，将血液置于PBS缓冲液中，混匀，上Sysmex-820自动血细胞计数仪测定血常规。(3)血清GM—CSF因子分别于造模后第1天、第3天、第7天各组随机抽10只小鼠，称重并记录，然后用固定板固定小鼠，消毒股动脉处并用剪刀逐层剥开，在股动脉处剪开用EP管接取股动脉血，离心，4度，2000r／5min，用微量移液器取上部血清，放入-80度液氮冰箱备用，采用双抗体夹心ELlSA法对样品进行测定，具体按试剂盒说明进行操作。(4)胸腺系数和脾脏系数分别于造模后第l天、第3天、第7天完成取股动10军医进修学院硕士学位论文脉血的小

8、鼠，颈椎脱臼处死，剥离胸腔和腹腔，取出胸腺和脾脏，除净软组织和毛发，于微量天平上称重并记录，胸腺系数和脾脏系数。胸腺系数(啦矿炉脾脏系数(mg／g)=胸腺湿重／／J＼鼠体重脾脏湿重／小鼠体重(