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时间:2019-01-30
《notch1(nicd)过表达真核载体构建及对大鼠bmscs增殖分化的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、天津医药2014年9月第42卷第9期883Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响112△33杜红阳李东宁付海燕包翠芬秦书俭【摘要】目的探讨过表达Notch1(NICD)基因对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化的影响。方法构建Notch1(NICD)过表达真核载体,实验分正常对照组(CON组,不做转染)、阳性对照组(空载体组,将质粒pEGFP-N1转染BMSCs)和转染组(将重组质粒pEGFP-N1-NICD转染BMSCs)。转染48h后观察细胞一般状态,Real-timePCR和Westernb
2、lotting检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1基因和蛋白表达,流式检测转染后细胞凋亡、细胞周期,MTT检测细胞增殖情况。结果重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致。转染组和空载体组BMSCs均可表达绿色荧光。转染组GFAP、Notch1的基因和蛋白表达均高于CON组和空载体组(均P<0.05),空载体组与CON组差异无统计学意义;各组间NSE的基因和蛋白表达差异无统计学意义。转染组存活细胞比率低于CON组和空载体组,早期细胞凋亡比率、晚期细胞凋亡比率均高于CON组和空载体组;
3、空载体组晚期细胞凋亡比率高于CON组。转染组细胞处于G1/G0期的比例高于CON组和空载体组,处于S期和G2/M期的比例低于CON组和空载体组(均P<0.05)。除转染1d时各组MTTA490值差异无统计学意义外,其余时点转染组MTTA490值均低于CON组和空载体组(均P<0.05)。结论高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖,且表现诱导向神经胶质样细胞分化。【关键词】细胞增殖;细胞分化;转染;神经胶质原纤维酸性蛋白质;磷酸丙酮酸水合酶;Notch信号通路;骨髓间充质干细胞;诱导;Notch1(
4、NICD)【中图分类号】R349.5【文献标志码】A【DOI】10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.009ConstructionofNotch1(NICD)EukaryoticExpressionVectorandItsInfluenceontheProliferationandDifferentiationofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsinvitroDUHongyang1,LIDongning1,FUHaiyan2△,BAOCuifen3,QINShujian31De
5、partmentofDermatology,2ICUintheFirstAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversity,3DepartmentofAnatomy,LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001,China△CorrespondingAuthorE-mail:4197123@163.com[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofconstructtheNotch1(NICD)eukaryoticexpre
6、ssionvectorontheproliferationanddifferentiationofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)invitro.MethodsRatBMSCswereexperimentedastheobject.NICDeukaryoticexpressionvectorwasconstructed.pEGFP-N1-NICDexpressingplasmidswereusedtotransfectBMSCs.Thestudyincludedcontrolgroup(CO
7、Ngroup),emptyvectorgroup(VECgroup)andthetrans⁃fectiongroup(TRAgroup).After48-hourtransfection,BMSCswereobservedforgeneralmorphology.Theproteinexpres⁃sionsofNSE,GFAPandNotch1weredetectedbyreal-timePCRandWesternblottingassayrespectively.Theapoptosis,cy⁃cledistributionandcel
8、lproliferationwereevaluatedbyflowcytometryandMTTassay.ResultsTheDNAsequencingcon⁃firmedthatthepE
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