丙型肝炎病毒(hcv)检验技术进展探究

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1、丙型肝炎病毒（HCV）检验技术进展探究【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2012）12-0499-02【摘要】：防控丙型肝炎传染源及阻断传播途径最为有效的手段就是早期准确诊断并及时发现HCV感染者。从传染源和传播途径两方面控制丙型肝炎[1],笔者将对丙型肝炎病毒临床检验技术进展研究。【关键词】HCV抗原检测核心抗原核酸检测技术（NAT）同时检测自1989年建立了丙肝病毒抗-HCV检测方法以来，随着医学检测技术和仪器的不断发展，丙型肝炎的检测技术一直处于不断发展中。到目前为止，丙型肝炎检测技术主要有抗-HCV检测、HCV-

2、RNA核酸扩增检测、HCV核心抗原的检测以及同时检测抗-HCV和HCV核心抗原4种类型。笔者将对丙型肝炎临床检验技术进展研究如下。1抗-HCV的检测最早出现的HCV检测技术是抗-HCV的检测。由于HCV在病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很低，这就使得用常规方法难以直接检测，经过十几年的不断改进和发展，其检测方法又演变出多种，如：双抗原夹心ELISA、间接酶联免疫吸附实验（间接ELISA）、重组免疫印迹法（RIEA）、蛋白芯片检测法以及免疫层析法。在这些方法之中，重组免疫印迹法（RIBA）是抗体检测的金标准，蛋白芯片检测法主要用于抗-HCV的分型。而ELISA

3、由于其操作简单，检测设备廉价，因此成为应用最广的抗体检测技术。根据出现时间的先后以及使用抗原的不同，抗-HCV检测技术可分成三代。第一代抗-HCVIgG试剂盒所用的抗原来自病毒基因组非结构区（C100）,它的使用使HCV的输血感染率下降了80%以上。但其缺陷是：灵敏度较低，抗体检出时间较晚，敏感性也较高，达到80%〜90%,但假阳性较高。第二代试剂除了包被C100抗原外又加入了HCV核心区多肽C22—3和非结构区抗原C33CO抗-C22-3和抗-C33C感染后出现较早，敏感性和特异性明显提高，感染后8〜12周即可检测。且对HCV的特异性较好，二者联合应用可进一步

4、提高检出率。第三代HCV抗体ELISA试剂中采用了重组的NSS多肽，核心区抗原比例相对下降，而相应地增加了非结构区的NSS区C33C抗原的比例，添加了NSS区抗原使其敏感性和特异性得到进一步改善。2HCV-RNA核酸扩增检测技术从外周血中检出HCVRNA是HCV复制活跃的可靠指标，在感染2个星期内的血清中可检测到HCVRNA,在感染自然恢复前血清中HCVRNA将达到一个高峰，目前NAT检测被国内外部分机构作为HCV感染的确认方法。但HCVRNA在达到峰值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到［2］。同时HCVRNA还受进食的影响，易与血中脂质及脂蛋白结合，降

5、低检出率。因此在一定程度上影响了NAT检测方法的完美。另外由于NAT检测技术本身在技术和设备上要求较高，且耗时、实验步骤较多（其中任何步骤出现问题均影响其检出）,因此该方法也容易因污染而出现假阳性，难以在常规工作或基层实验室推广，限制了其应用的普遍性。NAT检测技术同为检测HCVRNA,但不同的厂商发展出不同的方法和技术，其中PCR技术发展得最为迅速，也得到了最广泛的应用，最早的是RT-PCR,然后是套式PCR,现在是实时荧光定量PCR,检测灵敏度特异性不断提高，且实现了全自动定量检测。最新的NAT研究有环介导等温基因扩增技术（LAMP）以及基因芯片技术［3,4

6、］,由于LAMP技术操作简单，且无需特殊仪器，具有广阔的应用前景。3HCV抗原的检测近年来对HCV抗原的检测方法的研究不断取得进展，关键点在于单克隆抗体的研制以及抗原抗体复合物解离剂的研究。近期美国Ortho公司已推出了用双抗体夹心法定性或定量检测血清样品中总的或游离的HCV核心抗原ELISA试剂盒，与RT-PCR方法相比，具有操作简单、耗时短、对实验环境要求较低以及假阳性率低等特点，在临床上可用于HCV血清学转换前的早期急性丙型肝炎诊断、抗-HCV阳性感染者的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析等。HCV核心抗原存在的时间较短（约27〜70d）

7、,所以HCV核心抗原的检测还要结合抗-HCV的结果。同时HCV核心区基因的变异也可能影响了HCV核心抗原的检测，比如HCV核心区49位氨基酸的突变就降低了抗原测定的敏感性。改进现行试剂盒的主要途径是提高单克隆抗体对于天然抗原的构象表位的亲和力。对于非结构蛋白的检测主要为NS3、NS4和NS5位点的蛋白，由于这部分蛋白出现变异的概率较大，目前仅见报道。4同时检测抗-HCV和HCV核心抗原联合检测抗原抗体的思路是HCV筛查试剂盒和血清学检测的发展方向。目前主要把HCV核心抗原和外周蛋白抗体及部分核心抗体相结合的检测试剂盒。HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感

8、染指标，几乎与HCVRN