hiv-aids免疫异常激活和其和疾病进展相关性探究

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1、HIV/AIDS免疫异常激活和其和疾病进展相关性探究［摘要］目的：分析我国艾滋病患者的免疫异常激活水平及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免疫异常激活在HIV/AIDS发病中的作用。方法：通过检测287例不同病情的未接受过任何治疗的HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物及血浆病毒载量，对相关数据进行相关性分析。结果：不同疾病进展阶段的HIV/AIDS患者免疫异常激活水平显著不同，随着疾病进展，免疫异常激活水平显著升高。且外周血CD4+T细胞计数与免疫异常激活标志物呈显著的负相关。结论：感染HIV后诱导的免疫异常激活可能是导致CD4+T细胞计数逐渐降

2、低及疾病进展的机制之一。［关键词］HIV；AIDS；免疫异常激活；疾病进展；相关性HIV介导的直接杀伤作用曾被认为是CD4+T细胞减少的主要原因［1］。但研究发现，单单高HIV病毒载量似乎并不足以导致病情加重及疾病进展。有研究表明，在HIV/AIDS中，外周血中实际被HIV病毒感染的CD4+T细胞数量很低，绝大多数死亡的CD4+T细胞是未被病毒感染的细胞［2］。这说明HIV的直接杀伤并不能解释CD4+T细胞的迅速减少。因此，在艾滋病发病及进展过程中，可能有其他机制的参与。艾滋病中的慢性免疫激活现象是Ascher和Sheppard首先提出的[3],感染HIV病毒后，HIV抗原的持续刺激使

3、机体免疫系统处于异常增高的激活状态，这种慢性的异常激活，是艾滋病的重要特征，也是HIV相关的免疫缺陷的原动力。目前,HIV/AIDS中的免疫激活现象国外研究较多，国内HIV/AIDS患者的免疫激活状态如何及其与疾病进展的关系报道较少。本研究拟通过检测287例不同病情的未接受过任何治疗的HIV/AIDS患者外周血CD4+T细胞计数，免疫异常激活标志物及血浆病毒载量，分析我国艾滋病患者的免疫异常激活水平及其与CD4+T细胞计数、疾病进展的相关性，探讨免疫异常激活在HIV/AIDS发病中的作用。1材料1.1研究对象287例未接受过抗病毒治疗的HIV/AIDS患者，均来源于云南省文山州中医医院

4、、云南省传染病医院/关爱中心、广西瑞康医院、广西柳州龙潭医院、湖北中医药大学临床医学院、遵义医学院附属医院，所有入选病例均为HIV抗体阳性，经WesternBlot确认试验证实。排除孕妇、合并有自身性免疫性疾病的患者及肝肾功能异常者。另选取性别、年龄相匹配的40例HIV抗体阴性健康鲜血员为对照组，均为来源于广安门医院的工作人员，所有受试者均于采血前签署知情同意书。1.2主要仪器FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司）及System340bDNAAnalyzer病毒载量分析仪（德国Bayer）等。1.3主要试剂CD3/CD8/CD45/CD4,CD8/CD38/CD3/HLA-D

5、R,IgGl/IgGl/CD3/IgG等四色荧光抗体（美国BD公司）；FACSLysingSolution（溶血素）（美国ED公司）；HIV-1RNA3.0Assay试剂盒（德国Bayer公司）。2方法2.1标本采集及PBMCs的分离含有EDTA抗凝剂的5mL真空采血管采集静脉血2mL,然后轻轻颠倒抗凝管8次，使血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。在4°C保存和运输样品，在6h之内送达检测实验室进行处理，24h之内完成检测。2.2外周血淋巴细胞计数检测绝对计数：取新鲜全血50nL,放入专用的CD4+T绝对计数管中，加入CD3-FITC/CD4PE/CD8Percp抗体，混匀后，室温避光

6、孵育15min,加入450uL免洗溶血素，充分混匀，室温避光15min后上机，采用MultiSET软件自动计数系统检测CD4+T细胞及CD8T细胞绝对计数。相对计数：于流式上样管中加入相应抗体各20uL,取100PL全血加入到相应的试管中，不要碰到管壁（若碰到管壁，须用棉签擦干净）。涡旋混匀，室温避光放置20mino取出试管，每管加入1倍稀释的FACSLysingSolution2mL,轻轻混匀（低速，3s）,避光10mino待管内液体透亮。然后1200r•min-1,离心5min,弃去上清液。每管加入2mL的PBS,轻轻混匀（低速,3s）,1200r•min-1,离心5min,弃去上

7、清液。加入0.5mLPBS混匀，4匸避光，lh内使用BDCellquestPro软件获取样本，上机前应充分混匀。使用BDCellquestPro软件分析获取的样本，以CD3+/SSC圈T淋巴细胞门，以IgGl/IgGl/CD3/IgGl为同型对照，分析CD8+CD38+,CD8+HLA-DR+占T淋巴细胞的百分比。2.3血浆HIV载量的检测用EDTA抗凝采血管采集外周静脉血3-5mL,然后轻轻颠倒抗凝管10次，使血液与抗凝剂充分混匀。采血后6h