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时间:2019-01-06
《肝细胞生长因子促进骨形态发生蛋白9诱导小鼠骨髓间充质干细胞c3h10成骨分化的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、肝细胞生长因子HGF促进骨形态发生蛋白9BMP9诱导小鼠骨髓间充质干细胞C3H10成骨分化的研究惠慧,罗聪*,毕杨(重庆医科大学附属儿童医院重庆400014,重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所干细胞实验室,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿科学重庆市重点实验室,重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地)摘要:目的探讨肝细胞生长因子(Hepatocytegrowthfactor,HGF)联合骨形态发生蛋白9(Bonemorphogeneticprotein9,BMP9)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(C3H10)成骨分化的影响,并探讨其可能的分子机制。方法用重组腺病毒介
2、导BMP9在C3H10细胞中过表达,同时联用20ng/ml肝细胞生长因子HGF诱导细胞什么细胞,请表述完整。,Real-timePCR检测细胞同上。成骨分化相关基因骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因mRNA水平的表达变化;Westernblot检测OC、OPN的蛋白表达水平;ALP染色及ALP读数分析C3H10细胞碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的变化;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积;Real-timePCR检测经典信号通路Smad1/5/8在此诱导过程中的表达水平。结果BMP9单独作用
3、能诱导C3H10细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性,单独HGF有较弱的成骨诱导作用,但与BMP9联用可显著增强C3H10细胞成骨特异性标志物OC与OPN的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),促进ALP活性,及晚期的钙盐沉积;HGF能刺激Smad1/5/8信号通路mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。结论肝细胞生长因子(HGF)可显著增强BMP9诱导C3H10细胞成骨分化的作用,可能是通过激活Smad经典信号通路来实现的。关键词:骨形态发生蛋白9;肝细胞生长因子;骨髓间充质干细胞;成骨分化HGFpromotestheosteogenicdifferentiat
4、ionofmesenchymalstemcellsinducedbybonemorphogeneticprotein9HuiHui,LuoCong*,BiYang(Children’sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing,China,400014,StemcellBiologyandTherapylaboratory;MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders;KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing;C
5、hongqingInternationalScienceandTechnologyCooperationCenterforChildDevelopmentandDisorders)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofhepatocytegrowthfactor(HGF)onbonemorphogeneticprotein9(BMP9)inducedosteogenicdifferentiationofC3H10mesenchymalstemcells(MSCs)anditsmolecularmechanism.Methods
6、C3H10cellsweretreatedbyrecombinantadenovirusexpressingAd-BMP9infectionandHGF(20ng/ml)induction.ThemRNAexpressionandproteinlevelsofosteocalcin(OC)andosteopontin(OPN)weredeterminedbyReal-timePCRandWesternblotrespectively.Theactivityofalkalinephosphatase(ALP)wasdetectedbyALPstainingandactivi
7、tyassay.CalciumdepositionwasdetectedbyAlizarinRedSstaining.Atlast,mRNAexpressionofSmad1/5/8wasanalyzedbyReal-timePCR.ResultsBMP9aloneinducedtheosteogenicdifferentiationofC3H10cellsandincreasedtheALPactivity.HGFaloneslightlyinducedosteogenicdifferentiation,whilesigni
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