肝细胞生长因子促进骨形态发生蛋白9诱导小鼠骨髓间充质干细胞c3h10成骨分化的研究

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1、肝细胞生长因子HGF促进骨形态发生蛋白9BMP9诱导小鼠骨髓间充质干细胞C3H10成骨分化的研究惠慧，罗聪*，毕杨(重庆医科大学附属儿童医院重庆400014,重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所干细胞实验室,儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室,重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地)摘要：目的探讨肝细胞生长因子（Hepatocytegrowthfactor，HGF）联合骨形态发生蛋白9（Bonemorphogeneticprotein9，BMP9）诱导小鼠骨髓间充质干细胞（C3H10）成骨分化的影响，并探讨其可能的分子机制。方法用重组腺病毒介

2、导BMP9在C3H10细胞中过表达，同时联用20ng/ml肝细胞生长因子HGF诱导细胞什么细胞，请表述完整。，Real-timePCR检测细胞同上。成骨分化相关基因骨钙蛋白（Osteocalcin，OC）及骨桥蛋白（osteopontin，OPN）基因mRNA水平的表达变化；Westernblot检测OC、OPN的蛋白表达水平；ALP染色及ALP读数分析C3H10细胞碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）活性的变化；茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积；Real-timePCR检测经典信号通路Smad1/5/8在此诱导过程中的表达水平。结果BMP9单独作用

3、能诱导C3H10细胞向成骨方向分化，并增强细胞ALP活性，单独HGF有较弱的成骨诱导作用，但与BMP9联用可显著增强C3H10细胞成骨特异性标志物OC与OPN的mRNA及蛋白表达水平（P<0.05），促进ALP活性，及晚期的钙盐沉积；HGF能刺激Smad1/5/8信号通路mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。结论肝细胞生长因子（HGF）可显著增强BMP9诱导C3H10细胞成骨分化的作用，可能是通过激活Smad经典信号通路来实现的。关键词：骨形态发生蛋白9；肝细胞生长因子；骨髓间充质干细胞；成骨分化HGFpromotestheosteogenicdifferentiat

4、ionofmesenchymalstemcellsinducedbybonemorphogeneticprotein9HuiHui,LuoCong*,BiYang(Children’sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing,China,400014,StemcellBiologyandTherapylaboratory;MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders;KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing;C

5、hongqingInternationalScienceandTechnologyCooperationCenterforChildDevelopmentandDisorders)Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofhepatocytegrowthfactor(HGF)onbonemorphogeneticprotein9（BMP9）inducedosteogenicdifferentiationofC3H10mesenchymalstemcells（MSCs）anditsmolecularmechanism.Methods

6、C3H10cellsweretreatedbyrecombinantadenovirusexpressingAd-BMP9infectionandHGF(20ng/ml)induction.ThemRNAexpressionandproteinlevelsofosteocalcin（OC）andosteopontin（OPN）weredeterminedbyReal-timePCRandWesternblotrespectively.Theactivityofalkalinephosphatase(ALP)wasdetectedbyALPstainingandactivi

7、tyassay.CalciumdepositionwasdetectedbyAlizarinRedSstaining.Atlast,mRNAexpressionofSmad1/5/8wasanalyzedbyReal-timePCR.ResultsBMP9aloneinducedtheosteogenicdifferentiationofC3H10cellsandincreasedtheALPactivity.HGFaloneslightlyinducedosteogenicdifferentiation,whilesigni