培养基配制、分装和灭菌

《培养基配制、分装和灭菌》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、一、实验目的1了解并掌握培养基的配制、分装方法；2拿握各种实验室灭菌方法及技术。二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。山于微生物具有不同的营养类型，対营养物质的要求也各不相同，加Z实验和研究的目的不同，所以培养某的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养棊中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长索以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一•定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98〜100°CT融化，于45°C以下

2、凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。任何-•种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高床蒸汽灭菌。三、实验材料1、器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养IIIL盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒粘灯、棉花、线细、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。2、药品试剂蛋白月东、牛肉膏、NaO.K2HPO4.琼脂、NaN03>KQ、MgS04、FeS04、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸钱、5%

3、NaOH溶液、5%HCI溶液。3、流程称药品一溶解一调pH值一融化琼脂一过滤分装一包扎标记->灭菌一摆斜面或倒平板。四、实验步骤1培养基的制备1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当人小的烧杯屮，琼脂不要加入。蛋白腺极易吸潮，故称量时要迅速。1.2溶解用量筒取一定量（约占总量的1/2）蒸饰水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉川少塑冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化质，补足水分。1.3调节pH根

4、据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。1.4溶化琼脂固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分（水需预热）。注意控制火力不要使培养皋溢出或烧焦。1.5过滤分装分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管-•般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。1.6包扎标记培养基分装后加好棉塞或

5、试管帽，再包上一层防潮纸，川棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。1.7灭菌上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为12VC20min,以保证灭菌效果和不损伤培养棊的有效成份。培养基经灭菌肩，如需要作斜而固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜而，斜而长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养棊灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。1.8倒平板将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45〜50°C,立刻倒平板。2、灭菌方法灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍

6、物理方法的一种，即加热灭菌。加热火菌包括湿热和干热火菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌n的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同—•温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌-体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。2.1湿热灭菌煮沸消毒法：注射器和解剖器械等均町采川此法。先将注射器等用纱布包好，然后放迹煮沸消毒器内加水煮沸。对丁-细菌的营养体煮沸约15〜30min,对丁•芽砲则需煮沸约1〜2h。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验

7、中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是棊于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2吋，水蒸气的温度升高到12VC,经15〜30min,可全部杀死锅内物品上的各种微牛物和它们的范子或芽孑但。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都对应用此法灭菌。2.2操作方法和注意事项加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。装料、加盖：火菌材料放好后，关闭火菌器盖，采川对如式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使熬汽锅密闭，勿使漏气。排气：打开排气

8、口（也叫放气阀）。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min,使锅内冷空气完全排净。升压、保