培养基的配制和灭菌1

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1、（一）实验目的（二）实验原理（三）实验器材（四）实验方法（五）实验作业培养基的配制和灭菌（一）实验目的1、明确培养基的配制原则；2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。（二）实验原理培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基.培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物

2、理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基常用加热灭菌法：1、干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2、湿热灭菌⑴高压蒸汽灭菌法⑵间歇灭菌法⑶煮沸消毒法灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。（三）实验器材1.药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、5％NaOH溶液、5％盐酸溶液；生理生化培养基。2.器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、pH试纸、试管、三角瓶、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。1.称量按照培养基配方，准确称

3、量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂粉20.0g,自来水水1000ml,pH7.0。生理生化用培养基（四）实验方法培养基的制备过程称量---溶解----调节pH值----过滤----分装及包扎----灭菌----灭菌后试管摆放斜面2.溶解加入所需要的水量，搅拌，使其溶解。3.调节pH值用玻璃棒沾少许液体，测量pH值。用氢氧化钠和盐酸调节pH。4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5.分装及包扎根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好

4、。6.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌20分钟。7.灭菌后试管摆放斜面8.灭菌后倒平板注意事项1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。返回