资源描述：
《高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究引言石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚［1］。未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致=J使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法［2］。其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌(Pseudonomonas.sp)［3］、芽抱杆菌(Bacillus.sp)[
2、4]、酵母菌(Yeasttrichosporon)[5]、根瘤菌(Rhizobia)[6]、醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)［7］等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中［8］。本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。1实验材料和方法1.1菌株来源采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口处污泥进行菌株筛选。1.2培养基基础培养基：NaCl
3、5.Og/L,蛋白腺10g/L,琼脂15〜20g/L,酵母浸膏5.Og/L,调节pH为7.0。以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaC120.1g/L,FeS04.7H200.01g/L,K2HP040.5g/L,MnS04.7H200.05g/L,NaCl0.2g/L,KH2P040.5g/L,MgS04.H200.01g/L,NH4N031.0g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0[8]o富集培养基:葡萄糖10.Og/L,营养琼脂33.Og/L,酵母浸粉10.Og/L,调节pH为7.5。1.3研究内容与方法1.3.1菌
4、株和的驯化和分离在超净工作台中，将10mL含0.lg/L苯酚的基础培养基倒入培养皿，取10g污泥加90mL蒸惚水搅拌15min,静置5min后取上层清液为菌原液[8]。取lmL菌原液加入无菌水中分别制成100、10-K10-2、10-3、10-4等梯度的菌液，然后分别从各菌液试管中取lmL用涂布法接种于基础培养基平板上。在pH值为7、25°C情况下培养24〜48h。挑取单一菌落于富集培养基平板上划线、扩繁。编号，将平板置于25°C的恒温培养箱中培养24〜48h后放于4°C冰箱保存。依据革兰氏染色进行微生物鉴定。1.3.2降酚菌
5、的筛选将0D（吸光度）为600的单一菌株，按20%（体积分数）的接种量接入无机盐培养基中，筛选同一时间内对苯酚降解能力最强的作为优势菌株。1.3.3培养温度对菌株降酚能力的影响在pH值为7时，蘸取适量的菌液涂布培养与生化培养箱中调节温度分别为20°C、25°C、30°C、35°C、40°C。24h后测定苯酚浓度计算苯酚降解率。1.3.4培养pH值对菌株降酚能力的影响将菌液以20%的量接种于苯酚浓度为1000mg/L的无机盐培养基中，培养条件为28°C、270r/min,调节pH值为5.0、6.0、7.0、8.0和9.0,研究p
6、H值对菌株降酚能力的影响。24h后测定苯酚浓度并计算苯酚降解率。1.3.5底物浓度对菌株降酚能力的影响将菌液以20%的量分别接种于苯酚浓度为0.1、0.5、1.0、1.5、2.2g/L的富集培养基中，培养条件为270r/min>28°C、pH值7,比较菌株在苯酚浓度不同时对苯酚降解率的影响，24h后测定苯酚浓度并计算苯酚降解率[9]o1.3.6接种量对菌株降酚能力的影响设置菌株接种量分别为5%、10%>15%、20%、25%、30%,株培养条件为pH值为7、270r/min、28°C、底物浓度为1000mg/L.装液量50mL
7、,24h后测定苯酚浓度并计算苯酚降解率。1-4分析测定方法分析温度、接种量.pH值及底物浓度等因素对该苯酚降解菌降解性能的影响。采用4-氨基安替毗林分光光度法测量苯酚浓度。苯酚的降解率由式（1）计算[10]O降解率（％）=（1-处理后体系中苯酚浓度/体系中苯酚浓度）X100%（1）2结果与讨论2.1降解菌的初步鉴定对得到苯酚降解菌株进行初步鉴定，并分别命名为BF-1、BF-2、BF-3、BF-4、BF-5、BF-6,其中BF-2菌株生长速度最快在培养基上直径达到89.lmm（平板直径90mm）,BF-4菌株生长速度最慢在培养基
8、上直径为56・4mm。镜检为革兰氏阴性菌，单个细胞呈杆状，细胞单个或数个连接。（见表1）。2.2温度对苯酚降解菌降解性能的影响不同温度下苯酚降解菌的降解率见图1。比较不同温度下菌株的降解率，可以发现菌株在温度在25-40°C时，随着温度的升高，苯酚降解率逐渐降低。在25°C时
