微生物菌种常规保藏技术规程来源accc

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1、国家自然科技资源平台微生物菌种常规保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》项目组二OO四年十二月十日前言2引言31范围42定义43基本原则54方法5附录A定期移植保藏法6附录B液体石蜡保藏法9附录C沙土管保藏法11参考文献13冃IJ6木规范山国家自然科技资源平台建设项目提出。本规范起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、屮国医学科学院医药生物技术研究所。本规范主要起草人：程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞

2、波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。引言微牛物菌种常规保藏是一类重要的基木操作技术，广泛应用于科学研究、教学及牛:物技术产业，是保护微生物菌种资源的重要手段，是科研教学及生物技术产业正常运转的重耍保障。本规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法三种常川微生物菌种保藏方法。制定本规程是为了规范微牛•物菌种常规保藏技术操作，加强管理，以达到保护微生物菌种资源，利用微工物菌种资源及实现资源共孚的目的。微生物菌种常规保藏技术规程1范围木规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基木原则和方法。本规程适用于微牛物菌种的帘规保藏工作。2定义本规

3、程采用下列定义。2.1微生物菌种资源microorganismresources指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。2.2菌种保藏cuIturepreservation是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原冇性状棊木稳定。2.3定期移植保藏法subculturing亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4°C—6°C进行保存并问隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。2.4液体石蜡

4、保藏法preservationunderIiquidparaffin亦称矿物汕保藏法，定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜血培养基上，最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于4°C—15°C进行保存的一种菌种保藏方法。2.5沙土管保藏法sandpreservation亦称载体保藏法。是指将培养好的微生物细胞或砲子用无菌水制成悬浮液，注入火菌的沙土管屮混合均匀，或直接将成熟沦子刮下接种于灭菌的沙土管小，使微生物细胞或他子吸附在载体上，将管中水分抽于后熔封管口或置干燥器中J-4°C-15°C进行保

5、存的一种菌种保藏方法。3基本原则3.1应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。3.3应保证菌种保藏的安全性，不能对周围环境造成污染和危害。4方法4.1定期移植保藏法见附录A。4.2液体石蜡保藏法见附录B。4.3沙土管保藏法见附录C。附录A定期移植保藏法A.1适用范围本方法适用于人多数细菌和真菌。A.2原理低温条件下保藏可减缓微牛•物菌种的代谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变,延长菌种保藏时间的目的。保藏培养基一般含较多有机氮，糖分总量不超过2%,既能满足菌种培养时生长繁殖的需要，乂可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。A.3技术要求A.3.1不同菌种应

6、根据耍求选择合适的培养基。A.3.2接种时要求无菌操作，避免染菌。A.3.3保藏期间要定期检查菌种存放的房间、冷库、冰箱等的温度、湿度，各试管的棉塞有无污染现象，如发现异常应取出该管，重新移植培养后补上空缺。A.3.4大量菌种同时移植时，各菌株的菌号、所用培养基要进行核对，避免发生错误。A.3.5每次移植培养后，应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照，检查无误后再存放。A.3.6斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造成损失。A.4方法与步骤A.4.1培养基制备A.4.1.1器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、

7、培养皿、烧杯、吸管等，根据不同情况洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。A.4.1.2溶解培养基配料先在烧杯屮放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维住素等材料加入水屮溶解，最后加足水量。A.4.1.3调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据耍求加稀酸或稀碱调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。A.4.1.4加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基屮，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。A.4.1.5过滤分装在二层纱布中间夹

8、入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装，斜面培养基不宜超过试管高度的四分之一。分装过程屮勿使培养基沾污管II