accc-微生物菌种常规保藏技术规程

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1、Ⅶ国家自然科技资源平台微生物菌种常规保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》项目组二〇〇四年十二月十日14Ⅶ目次前言………………………………………………………………………………………2引言………………………………………………………………………………………31范围…………………………………………………………………………………………42定义…………………………………………………………………………………………43基本原则……………………………………………………………………………………54方法…………………

2、………………………………………………………………………5附　录　A定期移植保藏法…………………………………………………………………6附　录　B液体石蜡保藏法…………………………………………………………………9附　录　C沙土管保藏法…………………………………………………………………11参考文献……………………………………………………………………………………1314Ⅶ前言本规范由国家自然科技资源平台建设项目提出。本规范起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业

3、科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所。本规范主要起草人：程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。14Ⅶ引言微生物菌种常规保藏是一类重要的基本操作技术，广泛应用于科学研究、教学及生物技术产业，是保护微生物菌种资源的重要手段，是科研教学及生物技术产业正常运转的重要保障。本规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法三种常用微生物菌种保藏方法。制定本规程是为了规范微生物菌种常规保藏技术操作，加强管理，以达到保护微生物菌种资源，利用微生物菌种资源及

4、实现资源共享的目的。14Ⅶ微生物菌种常规保藏技术规程1范围本规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基本原则和方法。本规程适用于微生物菌种的常规保藏工作。2定义本规程采用下列定义。2.1微生物菌种资源microorganismresources指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。2.2菌种保藏culturepreservation是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。2.3定期移植保藏法subculturing亦称传代培养保藏法

5、，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4℃－6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。2.4液体石蜡保藏法preservationunderliquidparaffin亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于4℃－15℃进行保存的一种菌种保藏方法。2.5沙土管保藏法sandpreservation14Ⅶ亦称载体保藏法。是指将培养好的

6、微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4℃－15℃进行保存的一种菌种保藏方法。3基本原则3.1应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。3.3应保证菌种保藏的安全性，不能对周围环境造成污染和危害。4方法4.1定期移植保藏法见附录A。4.2液体石蜡保藏法见附录B。4.3沙土管保藏法见附录C。14Ⅶ定期移植保藏法A.1　适用范围本方法适用于大多数细菌和真菌。A.2　原理低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代

7、谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变，延长菌种保藏时间的目的。保藏培养基一般含较多有机氮，糖分总量不超过2%，既能满足菌种培养时生长繁殖的需要，又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。A.3　技术要求A.3.1　不同菌种应根据要求选择合适的培养基。A.3.2　接种时要求无菌操作，避免染菌。A.3.3　保藏期间要定期检查菌种存放的房间、冷库、冰箱等的温度、湿度，各试管的棉塞有无污染现象，如发现异常应取出该管，重新移植培养后补上空缺。A.3.4　大量菌种同时移植时，各菌株的菌号、所用培养基要进行核对，避免发生错误。A.3.5　每次移

8、植培养后，应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照，检查无误后再存放。A.3.6　斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造成损失。A.4　方法与步骤A.4.1　培养基制备A.4.1.1　器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培