肝癌癌基因p28gank及其新家族成员p28-ⅱ的克隆 鉴定与功能分析

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3、肝细胞性肝癌(简称肝癌。HepatocellularCarcinoma，HCC)是我国最常见夔藤发艟癌之一，焚发生发震是壹体肉多蒸嚣参与、多步骤貉圈静炭杂遘稷。嚣前，尽管已缀鉴定了一些肝癌的抑瘸基因，如p53和p』6_舢洲，并明确了它们在肝薅审鹣特舅牲失滔，毽是袭瓤癌发囊串特异缝激活麴瘗基戳熹

4、】少觅鞭道。芦嚣矗糍是新近克隆的一个农肝癌中高表达的癌基因，其致瘢性可能舄p280AN‘蛋白通过离磷酸纯并阵解摔瘸蛋自gbl，促使细施自Gl期商S期转化有关。gbl与E2F转蒙因子榍结合共阕调控下游基因的表达；选些基因的开放与

5、细胞的增殪分裂有关。gbl-E2F转录复合物的功能受剿CDK4．CyclinDl．p16制K48信号通路的调控。本缀与国强安验室鲍研究郡谖骥，p2sGANK鼍缨熬羼麓激酶CDK4提缝会，撼零其在CDK4．CyclinDl-p16删“气_Rbl．E2F信号转蹲通路中的调节作用。零辑褒罄在逶避应霭NorthemBlot及受疫缀缓纯学接拳捡灏懿艿积麟基溺在天肝癌组织中的表达水平与I

6、笛床病理指标间的关联，确定p28溯胖基因在肝癌发生发震遥程孛静作蘑。邋过基禹转染、免疫荧光染色、细胞生物攀行为检测和裸鬣荷瘤等实验技术，研究p

7、280^N‘溅自在细胞内的定位及对于细胞生长能力的影响。应用逆转录．巢式PCR技术寻我p2妒4孵基因在肝癌内的新家族成员，并应用RT-PCR方法检测簸发现基阂在人翳瘪组织中的表达零平。避过免疫共沉淀、GSTpull．down等技术研究p28GANK和p28．H与抑癌灏白Rbl及细胞周期激酶CDK4间的相互作用，探讨贮s6ANK窥癣g．嚣在Rbl．CDK4-CyclinDl-p16科期‘篷号转导逶爨孛熬露瓣。Northernblot杂交显示，辟船副删基因在人脑组织中高表选，较弱表达于肺、脾、嚣黎瓿霰心飘，不表达予舞、获

8、、黉、，l、瑟秘大酝等游纯遂缀织。崧醴铡入艇癌组织中，p2艿删眦基暇mRNA的检出率为96，9％(62／64)，其中癌较瘀旁组织表达瞬显升高静蠢91．9％(57／62，2．708士1．418，P<0．001)。商门脉癌柱形成的肝癌p28Ga眦基因的表达摄著离子无癌栓的腮癌(p=0．021)。脾瘤组织内窍静脉馒滤的肝癌p28酬脯基因韵表达明鼹高于无静脉侵润的肝癌(p=0．047)。束发现p2∥觥载表达舞裹譬乙翳襄毒感染、矗漶AFP求乎、翳疆像、瓣攘大，l、及翳癌分缀等其它临床病理指标之间有明显的相关性。疱爱蠡磐摹《备弱

9、兔获天蝣86媸‘撬薄行瓣癌及霪莘耱警癌缀缓留学豹免疫缀纯结果显示．p280AN‘特异性高表达于恶性肝上皮细胞，不表达于良恶性胆管上皮细胞、筮三攀医去燮2Q盟级燧±望些浚塞藏震蕴要血管内皮细胞、Kuffer氏细胞及肝问质细胞。对肝癌组织的兔疫组化染色评分与临床瘸理资拳章程关联，发现p28GAN＆在嚣手癌内静过表述与瓣瘤大小鬃正穗关(p=o．009)，与赢清HBs抗原感染呈受相关(卢=0．001)，与Edmonson分级凰负相关。26例入肝癌缀织切片同时行p28GA狱与Rbl的免疫组化染色结果鼹示，p280ANK巍疑癌缨

10、溉胞核内救表达求平(NISscores)与Rbl的寝达无嘴显关联．而p28GANK在肝癌组织内的总体表达水平(CICSScores，胞核+胞浆)与Rbl蛋是静表达曼延撼关(，=8，475，P=0，019)。应用逆转录．巢式PCR技术首次在国人肝癌中发现了p勰侧M纂因新家族成员p28-II(GenBank登蒙号：AY057056)。p28-II与