胡萝卜lea基因家族新成员dclea1的克隆及其结构与表达特性分析.pdf

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1、%%"第!"卷第#期$%%"年#月!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!胡萝卜!"#基因家族新成员$%!"#!的克隆及其结构与表达特性分析!刘一鸣!刁丰秋!张雷!黄美娟"吴乃虎!""!#中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京!$$$%$；"#北京大学生命科学学院，北京!$$$%&摘要利用改进的9;<=代表性差示分析（>;=）技术，从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到"#$基因片段，以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的9;<=文库及用控渗法构建的基因组文库，获得了胡萝卜"#$基因家族的一个新成

2、员%&"#$!（?71@.1A注册号：=B’$%&’)）#该基因转录区由CDEF>区、两个外显子、一个内含子及’DEF>构成，启动区长!#"AG；开放阅读框为*%$GH，编码!C)个氨基酸和一个终止密码子#

3、休眠与萌发的过程，研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理#关键词胡萝卜!"#基因表达特性胚根发育胡萝卜体细胞胚是公认的进行植物发育分子生中分离到了一组含量丰富的-><=，命名为"#$物学研究，特别是胚胎及器官发生研究的一种良好-><=，其转译产物为晚期胚胎发育丰富蛋白（0.87的模式体系［!］#黄美娟等报道，通过改变培养基中7-GJNI6717:/:.G41O.18HJI87/1:），简称P,=蛋白#同蔗糖的浓度可人为地控制胡萝卜体细胞胚胎的发育时，在小麦、大麦、拟南芥、水稻、向日葵和大豆状态［"］#在含&K蔗糖的LM培养基中作调控培养等多种植物的胚中也发现了几十种类似的P,=蛋白

4、［CQ%］时，胡萝卜体细胞胚根的发育受到抑制，其他部分#研究表明，P,=蛋白是种子发育后期伴随表现正常；而一旦将处于调控培养的胡萝卜体细胞着成熟休眠过程形成的一类低分子量蛋白质，广泛地存在于高等植物种子内［)，!$］胚移至含!K蔗糖的LM培养基中作解调控培养时，#一般认为，此种蛋胚根生长的抑制状态便被解除，并迅速发育成根#白主要存在于细胞浆中，尤其在植物胚细胞质中具应用这种胡萝卜体细胞胚调控培养体系，研究从调有很高的浓度，例如在成熟棉花胚细胞中;&P,=蛋控培养到解调控培养的转换过程中相关基因表达活白占非细胞器胞质蛋白的*K［!!］#P,=蛋白的共同性的变化状况将有助于我们了解植物胚根

5、发育的分特征是富含赖氨酸、甘氨酸等亲水性氨基酸，而缺子机理［’］#乏半胱氨酸和酪氨酸残基［)］，这类蛋白质具有强的［*］在胚胎发育后期的棉花子叶亲水性和热稳定性，即使在煮沸的情况下也可以保!)%!年，;4J7等"$$’(!!(!)收稿，"$$*($!($%收修改稿"国家自然科学基金资助项目（批准号：’)+’$$*$）""通讯作者，,(-./0：1234567178/9:#.9#91第!"卷第#期$%%"年#月VV’持水溶状态［!"］中，体细胞胚发育至子叶胚时，便停止继续发育，#植物种子在脱水和休眠的过程中面临的水分胁迫使细胞组成成分晶体化，使细胞的有进入调控培养状态，将调控培养的材料转

6、入解调控序结构遭受破坏，而$%&蛋白具有高度的亲水性，培养基，培养到一定时间后取材#能把足够的水分捕获到细胞内，从而保护细胞免受!"#$%&’文库的构建与筛选水分胁迫的伤害［!’］#很多$%&蛋白在种子发育过取4#35调控状态的胡萝卜体细胞胚，用678-9,程中都呈现出特定的表达模式，其积累始于种子成:;<:=8-;>?0/&纯化试剂盒（@1A;?A-8A公司）提取熟末期和干燥期启动之时，并在以后的干燥过程中?0/&并用B8?

7、］#此外许多营养组织在外源脱落酸（&*&）、"%+-G臂连接#连接产物加入@A-9A5?<5A公司）进行体外包装"1#经测定该［!+］，这表明!"#亦是可以被诱导的基因#$%&蛋白-./&文库滴度为!J!43:K7F?$#因此对于!"#基因在植物胚胎发育过程中的表达机以随机引物试剂盒标记/0（"’)4I:）片段，筛选制，需要建立模式实验系统进行进一步的深入研-./&文库