settafiβ和chmp6的克隆 表达 纯化以及初步晶体学分析

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1、摘要及其相关蛋白质做了深入的研究工作并做出相关报道，但是具体的作用机制目前仍不甚清楚。对其结构的研究将为人们探索跨膜蛋白的降解机制提供重要基础。我们的工作主要集中于ESCRT-III中CI-IMP6亚基各个结构域的结构生物学研究。本论文研究计划中，已经顺利完成了整个课题的前期工作，包括CHMP6人工嵌合蛋白的构建、表达、纯化、晶体生长条件的筛选。本文简要介绍了CHMP6蛋白作为囊泡转运分类复合体亚单位的生物学功能，并对它与相关蛋白的同源性及保守性进行了一些讨论。文章中较为细致地讨论了整个实验的设计，材料与方法，操作过程及其遇到的问题与相应的解决方案，最后阐述了现阶段已取得的实验进展，对实验

2、结果做出合理的分析，并对于后期实验方案提出了一些设想与看法。关键词：囊泡转运分类复合体CHMP6X一射线衍射表达与纯化ABSTRACTABSTRACTIneukaryoticcells，allgenomicDNAwithahighdegreeofevolutionaryconservationofbasicprotein·-histoneandhistone-relatedchromatinassemblyfactorsconstituteanucleosomestmctIlre：therepetitionofthiselementformschromatinstructure．Chrom

3、atinstructurewouldpreventavarietyofenzymesandtheDNA-associatcdfactorfromapproachingtheDNAmolecule．Therefore，themaintenanceofchromatinstnlctureplaysallimportantroleintheeukaryoticgeneregulation．Changesinchromatinstmcturedependonthehistonemodificationandconformationalchange．Histonechaperoneisakindof

4、importantfactorsinvolvedinhistoneregulation．HistonechaperoneSETwhichisalsonamedtemplateactivatingfactorIp(TAr-Ip)isencodedbythesetgene．ThegeneWasfirstidentifiedinacuteundifferentiatedleukemia(AUL)asafusiongene晰也cangene．AseriesoffunctionaltestsshowthatSET／TAF-I[3isamulti—functionalprotein，involvedi

5、nmanyphysiologicalpathways，suchasthehistonebinding，nucleosomeassembly,DNAreplication，transcriptionandapoptosis．BiochemicalexperimentsshowthatSET／TAF—18containsanacidicdomain．Intheabsenceoftheacidicdomain，SET厂rAF-IBlosestheI-12A-H2Bhistonebindingactivityandinhibitionofhistoneacet)rlation．Histonecha

6、peroneswhichhavebeenisolatedshowahighdiversityofprimarystructure．Becauseoftheirquaternarystructureofthepoorlyunderstood,therelationshipbetweens虹uctureandfunctionhasnotbeenuniform．Recentstudiesonthes在ucnIreandfunctionofhistonechaperonesindicatethesimilaritiesanddifferencesbetweenthem．UptOdate．thes仃

7、ucnlreoffulllengthofSET／TAF—113hasnotbeenresolved．TolearnmoreabouttheSET厂】jAF-18s缸1lctureandmechanism，wecloned，expressedandpurifiedtheN—terminaltruncated22aminoacids，butwithacidicdomainofhumanSET／TAF—Ipprotein．Th