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时间:2018-12-09
《与gal审审1相互作用对肺泡发育的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、摘要摘要在哺乳动物肺组织,乃至整个呼吸系统进行正常生理活动的过程中,肺泡作为最基本的功能单位,起到了至关重要的作用。但是,对其发育过程分子机制的了解,却还相对较少。本实验室在前期研究工作中,筛选到了p311——-这一对肺泡形成具有潜在调控作用的基因。随后又鉴定出了在该过程中,P311蛋白的可能结合伴侣——Gal.1(galectin-1)。然而,对P311的细胞水平功能,目前还没有较为明确的报道。原因在于,其不属于任何已知的蛋白家族,也不具备任何保守的结构域能够提示其细胞功能。在这种情况下,本文选择从该蛋白与Gal-l的相互作用入手,来研究其调控肺泡形成的
2、具体机制。首先通过免疫共沉淀和双分子荧光互补实验,确证了两种蛋白在活细胞中异位共表达时的确能够发生相互作用。随后利用免疫组化方法证明,在肺远端发育过程中,内源P311与Gal.1能够共定位于肺泡上皮细胞和肌成纤维细胞,具备在体内真实结合的时空条件。而围绕二者的这种相互作用所展开的进一步研究又指出,在P311蛋白中,执行结合Gal.1功能的部位,是其分子中部的一段PEST模序。由于此区域实际上还充当了P31l在体内被泛素/蛋白酶体系统识别并降解的信号序列,而Gal-l的结合能够在其周围形成空间位阻,因此,这种结合将造成泛素蛋白连接酶E3无法再对该序列进行识别
3、或接近,P311可以暂时逃脱体内泛素途径的降解,以较为稳定的状态发挥生理功能。又由于这段PEST序列在空间上与分子内部一段极为保守的a一螺旋区域相邻接,因此,Gal.1对其的结合,还能够轻易带动该a.螺旋元件构象发生变化,使这一保守区处于激活状态,介导P311.Gal.1蛋白复合体对肌成纤维细胞分化过程的调控,进而影响肺泡的形态建成。以上模型为进一步阐释肺远端发育的分子机制提供了又一思路。关键词:肺泡发育、P311、Gal.1、PEST模序AbstractAbstractAsthemostimportantfunctionalunits,alveolipl
4、ayacriticalrolewhenthemammallung,eventheentirerespiratorysystem,conductsnormalphysiologicalactivities.However,themolecularmechanismsunderlyingalveolardevelopmentareinadequatelyunderstood.Wepreviouslyscreenedoutp311asapotentialgeneregulatingthisprocess,andthenidentifiedGal-1(galect
5、in一1)asapossiblebindingpartnerofP311proteinduringalveolization.Nevertheless,thecellularfunctionofP311hasbeenpoorlyreportedSOfar,becauseitdoesn’tbelongtoanyknownfamilyofproteinsandhasnoconservativedomainsthatprovidehintstoitscellularfunction.Hence,weherechoosetheinteractionbetweent
6、hisproteinandGal-1astheincisiontostudyitsconcretemechanismregulatingalveologenesis.Firstly,bycoimmunoprecipitationandbimolecularfluorescencecomplementationassays,weconfirmthefactthatthesetwoproteinscaninteractwitlleachotherwhencoexpressedectopicallyinlivingcells.Then,usingimmunohi
7、stochcmistrymethod,endogenousP311andGal一1arefoundcolocalizeinalveolarepitheliaandmyofibroblastsduringdistallungdevelopment,andthereforepossesthespatialandtemporalconditionstoreallyinteractinvivo.FurtherstudyonthisbindingreactionshowsthatitistheintermediatePESTmotifofP311moleculeth
8、atservesastheinteractionsitewimGa
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