新型at1受体拮抗剂的降压活性研究

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1、新型ATI受体拮抗剂的降压活性研究达雅静吴丹郑慧玲袁伟东陈志龙(通讯作者)(上海东华大学化学与生物学院生物医药研究室201620)【摘要】目的研宄新型化合物WD59作为ATI受体拮抗剂的降压活性。方法利用放射性受体结合实验，评价化合物对ATI受体亲和力大小；以自发性高血压大鼠(SHR)为模型，测定化合物的体内降压活性。结果与阳性对照洛沙坦相比，WD59号化合物有更好的ATI受体亲和力。结论化合物WD59作为一种新的抗高血压化合物只有很好的应用前景。【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)20-0143

2、-01贤素一血管紧张素系统(renin—angiotensinsystem,RAS)在.高血压发生和发展过程中起着重要的作用。因此合成新型的血管紧张素11受体桔抗剂对治疗高血压具有重要的意义［1-3］。木课题组以BMS-180560为先导化合物，通过构效分析、生物电子等排和结构拼合等药物设计基木方法，设计合成了化合物WD59:2-(5-((2-正戊基-4•甲基-6(-1-甲基苯并咪哇-2-基)苯并咪唑)甲基)-1H』引啜-1-基)苯甲酸，并进行了活性评价。1.材料1.1受试物与仪器新型化合物：东华大学生物医药研究组；EP214C型电子分析天

3、平：OHAUSCORP；SW-CJ-1FD型超净工作台：苏州净化；SN—682型γ计数器：上海H环厂；DZF-6020型真空干燥箱：上海一恒科学仪器有限公同；二氧化碳细胞培养箱：ThermoScientific；ZH-HX-Z无创尾动脉血压测量分析系统：淮北正和生物公司。2.实验动物雄性SHR，来自于中国科学院斯莱科上海实验动物中心。1.实验方法3.1放射性受体结合实验原代培养大鼠的血管平滑肌细胞细胞，取第3-6代用于实验。取一定量的化合物溶于ImL的DMSO溶液，浓度为10-2M,再10倍稀释成不同浓度的溶液（l×

4、10-10M〜l×10-4M）。细胞铺板（l×105/孔）后，每孔加入0.1nM1251-AngII以及不同浓度的新化合物（终浓度l×10-6〜l×10-12mol/L）,总体积为1000μL,4°C反应150min,反应结束后去除游离的1251-AngII,用PBS洗涤3次，加入0.1mol/LNaOH溶液消化lOmin,将细胞液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPadPrism4竞争结合曲线拟合程序处理即可得出新型化合物抑制与膜蛋白结合

5、的半抑制常数和IC50值［4-8］。3.2体内降压实验化合物剂量：分成低剂量组（5mg/kg，n=6）和高剂量组（10mg/kg，n=6）血压测量：（1）大鼠加温和固定：加温采用全身加温或尾部局部加温。固定采用有机玻璃固定器。加温和固定可分开进行或同吋进行。（2）确定起始脉搏水平：将鼠尾依次穿过尾套和脉搏换能器，调整尾巴位置和仪器增益，使尾动脉脉搏信号足够大。（3）测定血压：用橡皮球充气加压，使尾套内压力升高至脉搏完全消失，再加压20-30mmHg（2.66〜3.99），然后缓慢放气减压直至脉搏信号恢复起始水平，这吋从测压仪的显示屏上就可读

6、取收缩压、舒张压、平均动脉压和心率，连续测3次，取其平均值作为测定值［9］。2.统计学处理数据采用GraphPadPrism4作图软件和Excel2007软件作统计学分析，并制作图表，组间差异比较采用方差分析，数据采用x-&PlUSmn;S表示。3.实验结果5.1WD59化合物对ATI受体的亲和力化合物WD59和洛沙坦浓度依赖性抑制1251-AngII与血管平滑肌细胞细胞膜ATI受体的结合(图1)，IC50值分别为0.49±0.09nmol八和1.49±0.17nmol/Lo两者相互比较，差异具冇极显著性意义(P

7、<0.01)图1.WD59对1251-Angll与ATI受体结合的抑制曲线5.2不同剂量的WD59对SHR的体内降压结果(1)低剂量的化合物对SHR血压的影响：低剂量的化合物在给药后对平均动脉压的作用已经是比较显著的，给药后1小吋血压就有很大下降，3小时达到峰值，最大降压值为25mmHg，随后血压保持平稳，没有明显的冋复，直至24小吋后低剂量组与阴性对照相比仍有显著性差异。(2)高剂量的化合物对SHR血压的影响：高剂量的化合物对血压的下降作用比低剂量组更加明显，给药后第1小吋，血压即下降35mmHg，基本恢复正常水平，最大降压值出现在

8、给药后的第4小时，血压下降39mmHg。随后血压保持稳定，至24小时后，血压仍可下降30mmHgo1.讨论WD59号化合物剂量相关的抑制AngII与血管平滑肌细胞膜ATI受体的结