分析方法学验证技巧与重点

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1、分析方法学验证技巧与重点序言对于药学领域的方法验证ICH、药典委员会、CDE等权威机构都有相应的指导原则，虽然内容各有不同，但总的思路和原则其实是一致的。指导原则写的是一些很宽泛的指南性的内容，很少涉及具体操作以及为什么要这么做。笔者撰写本文的目的就是根据自己的经验和理解，深入剖析每个验证概念的含义，详细说明方法验证应该怎么做，为什么要这么做，以此为新进入药学研究领域的同仁解决所以然的问题。目标定这么大，而能力又实在有限，不当之处在所难免，敬请方家指正。以下具体操作过程及相应数值，可以作为参考，并不一定

2、适用于所有情况。欢迎一起交流，本人微信morice999。泰属性1•概念解析专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）存在下，采用的分析方法能正确测定被测物的能力。这句话的意思是被测物在其他成分的干扰存在下，依然能得出合理的结果。除去被测物之外，所有其他成分都是干扰源，以含量测定（外标法）为例，被测物是主成分峰，除此之外的供试品溶液中的一切其他成分都是干扰，包括稀释剂、辅料、有关物质、无机盐、残留溶剂等等。研究不可能覆盖所有的可能性，只需要研究高风险因素，一般来说稀释剂、辅料和有关物质是专屈性的高

3、风险因素。2•怎么做？为什么？1）主成分峰纯度在专属性验证的相关实验屮，主成分峰都应该考察峰纯度，确认主成分峰为单一成分的峰。具体做法是用DAD检测器进行峰纯度扫描或者用LC-MS确认没有其他成分。2）稀释剂应考察稀释剂对被测物的干扰，空白稀释剂出的峰应不干扰被测物。具体做法是按照质量标准规定的进样量检测空白稀释剂，记录色谱图。3）辅料取质量标准规定量的供试品中等量的空白辅料，按照规定分析处理，记录色谱图,空白辅料峰应不干扰被测物。4）有关物质有关物质分为两大块：工艺杂质和降解杂质。如果在二者均可获得的

4、情况下，将杂质分别定位，并配制一份混合溶液，根据检测内容的不同分别研究。含量测定各杂质峰应不干扰主成分的检测，即各杂质峰应和主成分峰达成基线分离，各杂质峰Z间没有要求，重叠也无妨，因为含量测定只需确认主成分峰不受干扰即可。有关物质中各杂质峰和主成分峰之间的分离度均应符合要求，一般不小于1.5。特殊情况可将某些杂质合并控制，如互为对映界构体的非对映界构体，它们在反相色谱法中一般都是重叠的峰。如降解杂质不可获得，应进行酸碱氧化破坏条件下考察可能的降解杂质的干扰,该实验一般都做，但不是必须做，如果已经对降解杂

5、质有了充分的研究，就无需做破坏实验。例如已经有了有效期内长期稳定性的研究结果，确认了稳定性期间的实际降解杂质。因为有些情况下，破坏实验的结果不是真实可能的降解杂质,这种情况以双氧水进行氧化破坏最为常见，破坏产物杂乱无章，甚至有可能因为该实验推翻分析方法。降解实验室一个很大的内容，所以在下个章节详细论述,需要注意降解实验应归属在专属性验证项下。解实验降解实验的做法各相关指导原则都没有提出具体的措施，所以各个实验室做法各有不同，本文阐述的是个人看法，并力图证明其合理性。为尽量避免降解实验产物与实际可能产生的

6、降解杂质的不一致的可能，降解实验应为长时间弱条件下进行。本人不建议用强条件如高浓度酸碱和双氧水并辅助加热等做法，因为强条件下可能会形成二次降解产物，并出现许多降解产物峰，增加方法验证的难度，而实际稳定性期间出现的降解杂质可能就一两个甚至没有。降解实验的目的为了预测稳定性期间的降解杂质，不是为了破坏而破坏。比如有说法应将主成分破坏5%-20%之间，但是一般条件破坏不了，就加强条件，必须在这范围内。而这是没有必要的，也是不合理的。以下内容详细论述我的降解实验的一般做法，个人见解，仅供参考。1•破坏条件与操作

7、配制一份5/10倍浓度的供试品储备液，分别取5ml置25/50ml量瓶中，分别加入0.1mol/l盐酸溶液、0.1mol/l氢氧化钠溶液、0.1%双氧水溶液（如氧化破坏杂质多而乱，可考虑更弱的条件，如溶液中充氧气饱和）5ml,室温放置1天，酸、碱分别加等量碱、酸中和，再分别加稀释剂稀释至刻度，。另分别取0.1mol/l盐酸溶液、0.1mol/l氢氧化钠溶液、0.1%双氧水溶液5ml置量瓶中，同法操作，作为各破坏条件下的空口。如为制剂，应同法做空白辅料的破坏实验。取上述5/10倍浓度的供试品储备液5ml置

8、25/50ml量瓶中，加稀释剂至刻度，作为供试品溶液。分别取上述溶液，按照质量标准规定进行分析，记录色谱图。注意：酸、碱和双氧水溶液浓度和放置吋间均可以根据破坏情况进行调整，如某个条件有降解倾向，应调节条件使破坏至5%-20%之间。如三者均未发现降解倾向，再放置一段时间如10天，依然如此，既可说明木化合物非常稳定，稳定性期间应不会产牛降解杂质。木人有一个项目按此条件做破坏，均未产牛破坏产物，长期稳定性试验2年，有关物质检测结果和0天分毫不差