实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测.doc

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1、实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH7.5磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢

2、二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500mL蒸馏水溶解。四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2)取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。注意：每批测定应设一个缓冲液的空

3、白对照。2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。（3）放置10min以上进行预反应，有条件时在37℃恒温装置中放置10min。预反应10min，预反应后的药片表面必须保持湿润。（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。与空白对照卡比较，

4、白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。2、样品检测结果记录并对检测结果进行评价。六、实验注意事项及说明：1、速测卡灵敏度指标如下表所示。部分农药检出限参考表农药名称检出限（mg/kg）农药名称检出限（mg/kg）农药名称检出限（mg/kg）甲氨磷1.7乙酸甲胺磷3.5久效磷2.5对硫磷1.7敌敌畏0.3甲萘盛25水胺硫磷3.1敌百虫0.3好年冬1.0马拉硫磷2.0乐果1.3呋喃丹0.5氧化乐果2.32、速测卡法符合率：在检出的3

5、0份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。3、葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指（体温）捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一

6、是药片表面缓冲溶液加得少、预反应后的药片表面不够湿润；二是温度太低。5、红色药片与白色药片叠合反应的时间以3min为准，3min后的蓝色会逐渐加深，24h后颜色回逐渐退去。方法二酶抑制率法（分光光度法）一、目的要求：学习酶抑制率法测定果蔬有机磷和氨基甲酸脂类农药残留的原理和方法，注意实验过程的操作要点。二、实验原理：根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中加入生化反应底物碘化乙酰硫代胆碱和乙酰胆碱酯酶，如果蔬菜不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量低，酶的活性就不被抑制，实验中加入的底物就能被酶水解，水

7、解产物与加入的显色剂反应产生黄色物质。如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，底物就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。用分光光度计在412nm处或农药残毒快速检测仪测定吸光值，根据计算出的抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。三、实验试剂和仪器：（一）试剂1、pH8.0缓冲液分别称取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000mL蒸馏水中。2、乙酰胆碱酯酶（实验专用酶）根据酶活力用缓冲溶液溶解，3min的吸光值变化ΔA0值应控制在0.3以上。摇匀后在0~5℃冰箱中保存

8、，保存期不超过4天。3、底物碘化乙酰硫代胆碱称取25.0mg碘化乙酰硫代胆碱，用3.0mL缓冲溶液溶解，在0~5℃下保存。保存期不超过2周。4、显色剂分别称取160mg二硫代二硝基苯甲酸和15