转染MicroRNA122类似物对肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响

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1、福建医科大学2011届硕士研究生毕业论文转染MicroRNA-122类似物对肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响中文摘要背景：原发性肝癌(primaryhepaticcarcinoma,PHC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。miR-122(microRNA-122)是存在于真核生物中的一种不编码蛋白质的单链小分子RNA。近年来有一些研究表明miR-122在肝癌的发生发展中起重要的作用。目的：研究miR-122对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制,为肝癌治疗的新方法提供实验依据。方法：实验分成四组：miR-122类似物(miR-122mimic)干预组、阴性对照（A

2、llStarsNegativeControlsiRNA）组、转染试剂组和空白对照组。根据试剂说明书的描述，将AllstarsHsCellDeathControlsiRNA（致死性对照siRNA）转染入HepG2细胞后观察细胞凋亡情况以估计细胞转染率。MTT法测定各组细胞培养24h、48h、72h的增殖抑制率；流式细胞仪检测各组细胞培养24h后经AnnexinV染色的细胞凋亡率；半定量RT-PCR检测各组细胞培养24h后Bcl-w、Bax、caspase-9、caspase-3的mRNA表达水平；细胞免疫组化（cellimmunohistochemistry）检测各组细胞培养24h

3、后Bcl-w、Bax、caspase-9、caspase-3的蛋白表达水平。结果：普通显微镜下观察细胞转染效率达80%。(1)MTT法结果显示：miR-122mimic干预组24h的增殖抑制率明显高于阴性对照组、转染试剂组与空白对照组（P<0.01）。miR-122mimic干预组24h抑制率高于48h及72h。(2)流式细胞仪检测结果显示:miR-122mimic干预组的细胞凋亡比例明显增加，与阴性对照组、转染试剂组及空白对照组比较，均具有明显差异（P<0.01）。(3)RT-PCR结果显示：与阴性对照组、转染试剂组及空白对照组比较，miR-122mimic干预组24h的Bcl

4、-wmRNA表达明显下调（P<0.01），caspase-9、caspase-3mRNA表达明显上调（P<0.01），BaxmRNA表达差异无显著统计学意义(P>0.05)。(4)细胞免疫组化结果显示：与这些对照组比较，Bcl-w蛋白表达明显降低(P0.05）。结论：miR-122mimc转染到肝癌细胞HepG2中，可以抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞的凋亡。其机制可能是通过线粒体途径促进肝癌细胞凋亡。关键词：miR-122类似物增殖凋亡HepG2细胞3福建医科大学

5、2011届硕士研究生毕业论文EffectsoftheproliferationandapoptosisofhepatocellularcarcinomacelllineHepG2bytransfectingmicroRNA-122mimicsABSTRACTBackground：Primaryhepaticcarcinoma(PHC)isoneofthemostcommonmalignanciesworldwide.MiR-122(microRNA-122)isasinglechainsmallmoleculeRNAthatdoesnotcodeforproteinspresen

6、tedineukaryotes.RecentstudieshaveshownthatmiR-122inhibitedhepatocellularcarcinomacell’sproliferationandstimulatedhepatocellularcarcinomacellapoptosis.Objective：ToobservetheeffectsoftheapoptosisofhepatocellularcarcinomacelllineHepG2bymicroRNA-122andexplorethepossiblemechanism.Toprovidetheexper

7、imentevidencesforthenoveltreatmentapproachesofPHC.Methods：Theexperimentweredevideintofourgroupsbydifferenttreatments:thatwasMiR-122mimicsgroup,NegativeControlsiRNAgroup,TransfectionreagengroupandBlankcontrolgroup.TheHepG2cellsapotosisaftertra