豚鼠螺旋蜗轴动脉sp能神经的结构论文

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1、豚鼠螺旋蜗轴动脉SP能神经的结构论文.freelodiolararteria;substanceP;immunohis-tochemistry;guineapigsAbstract:AIMToinvestigatetheinnervationcharacteris-ticsofSP-immunoreactivity（SP-IR）nervesinthespiralmodiolararteriaeofguineapigs.METHODSAvidin-botinperoxidaseplex（ABC）im

2、munostainingbinedinobenzidine-nickel（GDN）enhance-menttechniqueployedforimmunohistochemistry，andthedistributionsofsubstanceP（SP）underlight.RESULTSAlargenumberofSP-IRneuronesintheproximalendsofSMA.MeanberofSP-IRnervefibresshointhedistalendsofSMA.CONCLUS

3、IONSPmightplayanimportantroleintheregulationonthecochlearbloodfloa），生物素标记的猪抗兔IgG和ABC复合物（使用效价1200，Sigma）;Ⅶ型葡萄糖氧化酶和3，3-四盐酸二胺基联苯胺（DAB）均为美国Sigma公司产品.耳廓反射灵敏，体质量320～380g的健康杂色豚鼠15只，雌雄不拘.戊巴比妥钠（30mgkg-1，ip）麻醉后开胸，经主动脉插管灌注固定［7］.先以生理盐水冲出血液，继之灌以40gL-1多聚甲醛-0.5mLL-1

4、戊二醛磷酸缓冲液（PB，0.1molL-1，pH7.4）600～800mL，保留滴注1h.取下颞骨，打开听泡，在解剖显微镜下去除骨性耳蜗，取下蜗轴.在听神经表面剥离螺旋蜗轴动脉.投入40gL-1多聚甲醛-磷酸缓冲液中再固定12h后，再将标本置于250gL-l的蔗糖磷酸缓冲液中（4℃）直至沉底.标本用磷酸缓冲生理盐水（PBS，0.01molL-1，pH7.4）漂洗.1.2方法将螺旋蜗轴动脉按漂洗法置于反应槽内进行免疫组织化学反应.染色程序按照免疫组织化学ABC法，结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵增

5、强显色技术进行［8］.第一抗体孵育时间48h（4℃），第二抗体12h（室温），ABC复合物5h（室温）.每次孵育之间用PBS漂洗（5min，3次）.对照试验用PBS替代第一抗体进行孵育，其余操作与上述一致.血管铺片反应结束后，将螺旋蜗轴动脉从反应槽中取出并置于载玻片上，滴加蒸馏水3～4滴后于解剖显微镜下按原状铺展血管.铺展完毕后放置空气中自然干燥，随后浸入纯乙醇中脱水（10min，2次），转入二甲苯透明后DPX封片.2结果豚鼠SMA经免疫组化染色后，阳性结构明显，界限清楚，背景染色浅淡，所有阴性对

6、照未着色.在SMA近端的外膜层，可见数量较多的SP免疫反应阳性的神经元.多为圆形或椭圆形，直径约30～40μm，含3～5个突起，呈散在分布，并可见由胞体发出的神经纤维（Fig1）.局部放大后，可见SP-IR阳性神经元胞质内含有染色较深的点状颗粒（Fig2）.SMA中段及远端未见SP-IR阳性神经元，但血管外膜SP-IR阳性纤维密集呈网状，相互交错，粗细不均，有明显的交叉和分支，可见膨体（Fig3）.由SMA分出的外上放射状动脉，中放射状动脉以及内上放射状动脉均可见SP-IR阳性的神经纤维.但纤维密

7、度以外上放射状动脉为高.图1－图3略3讨论SP是最早发现的神经肽，广泛分布于中枢及外周神经系统［7-10］，在血管系统含量也很丰富.早在1931年，VonEluer等就已证明SP有血管扩张及刺激平滑肌的作用，并使血管通透性增加，腺体分泌增多［8］.多数学者认为，这一作用的机制可能是由于逆行刺激感觉神经，使周围C类无髓鞘的感觉神经末梢释放SP所引起［11］.SP对耳蜗微血管的作用也为一些实验证实.Vass等［12］探讨了辣椒素（capsaicin）对耳蜗血流的作用.发现小脑前下动脉内灌注15～50p

8、molmin-1的capsaicin，耳蜗血管呈剂量依赖性的扩张;而灌注150～200pmolmin-1或以上的剂量，经1～2min潜伏期后，产生比较稳定的耳蜗血管扩张.但这一作用可被特异性的SP受体拮抗剂［（D-ProZ，D-Trp7.9）-SP］所抑制［13］.该研究表明，从capsaicin敏感的SP能神经纤维释放的SP，在调控耳蜗血流方面，可能起着重要作用.本研究在豚鼠SMA发现分布广泛的SP-IR阳性纤维，从形态学上证实了SMA受SP-IR阳性纤维的支配.尽管目前对支配S