资源描述：
《vegf 基因在胃癌中的表达及其意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、VEGF基因在胃癌中的表达及其意义【摘要】目的：探讨VEGF基因在胃癌组织中的表达及意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测48例胃癌组织及30例正常组织中VEGF基因的表达。结果：48例胃癌组织标本中有29例表达VEGF基因，而30例正常组织均不表达VEGF基因，两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论：VEGF基因在胃癌组织中有较高的表达,对胃癌病人的免疫治疗和预后有重要意义。【关键词】VEGF基因；胃癌；逆转录PCR 胃癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，其恶性程度与各种癌基因、肿瘤抑制因子及几种生长因
2、子及其受体异常有关［1~4］。血管内皮生长因子(vascularendothelialgro以上的癌旁组织，共收集标本48例，其中男性28例，女性20例；高中分化27例，低分化21例，20例可见淋巴结转移；年龄24～78岁，平均年龄61.7岁。所有患者术前未经过化疗或放疗，病理类型为粘液腺癌、管状腺癌、印戒细胞癌。Trizol购自invitrogen公司，cDNA合成试剂盒购自MBI公司。 12方法 121RNA的提取Trizol法提取总RNA：组织块（约100mg）置匀浆器，加Trizol（约2ml）冷冻匀浆，室温孵育5m
3、in，加入氯仿（0.2ml氯仿/1mlTrizol）用力振荡15秒，室温孵育2~3min，4℃，12000rpm离心15min，取上清，加入异丙醇（0.5ml异丙醇/1mlTrizol），室温孵育60min，4℃，12000rpm离心15min，弃上清，75%乙醇洗涤沉淀一次（至少1ml75%乙醇/1mlTrizol），4℃，7500rpm离心5min，弃上清，风干沉淀，加DEPC处理水溶解RNA，-80℃保存备用。 122cDNA的合成反应体积为20μL，反应条件如下：MgCl25mmol/L，10×逆转录缓冲液2μL,dNT
4、P1mmol/L,逆转录酶15U,核酸酶抑制剂0.5U，Oligo(dT)15引物0.5μg,模板RNA1ug，加无RNase水至终体积20μL。42℃反应1h，99℃加热5min，然后快速冷却至4℃，以灭活逆转录酶,并防止逆转录酶与cDNA结合，逆转录得到的cDNA用作PCR反应的模板。 123PCR引物合成VEGF引物及内参照GAPDH引物。VEGF引物序列为：5'ATGGCAGAAGGAGGAGGG3’和5'CGAAACGCTGAGGGAGGCT3'，GAPDH的引物为：5’CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA
5、3’和5’ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA3’。 124PCR扩增两对引物的反应体系均为25μL,VEGF反应体系包括cDNA产物2μL,MgCl21.5mmol/L,10×Buffer2.5μL，dNTP0.04mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq酶1U，加去离子水至终体积25μL，混匀后滴加无菌石蜡油覆盖液面，瞬时离心后置PCR扩增仪中扩增扩增条件为94℃预变性5min，然后94℃55sec,50℃55sec,72℃1min24sec，共35个循环,最后72℃延伸5min。GAPDH反应体系包
6、括：cDNA模板2μL，MgCl21.5mmol/L，10×Buffer2.5μL,dNTP0.2mmol/L，引物0.5umol/L，Taq酶1U；PCR扩增条件为94℃1min,55℃1min,72℃1min24sec，共30个循环,然后72℃延伸5min。取10μL扩增产物于含溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶中电泳,80V,1h，紫外透射仪观察结果，VEGF基因阳性扩增条带为420bp，内参照基因GAPDH扩增条带为200bp。 13统计学分析数据用SPSS10.0软件处理,两组比较采用χ2检验。 2结果 GAPDH作为内参
7、照,在所有组织标本中均有稳定表达,用以证实实验结果的可靠性。48例胃癌组织标本中有29例，30例相应正常组织均不表达VEGF基因（图1）,两组比较P<0.05,差异有显著性。 1分子量标准；2、3癌组织；4癌旁组织 图1VEGF基因的RT-PCR检测（略） 本研究对VEGF基因表达与不表达的胃癌病人进行了临床资料分析,VEGF基因的表达与年龄、性别、大小、组织学类型无关,但与肿瘤的浸润深度、临床分期及淋巴系统转移具有显著的相关性(P<0.05)，见表1。 表1VEGF表达与胃癌临床病理指数的关系（略） 3讨论
8、胃癌是我国高发恶性肿瘤之一，手术仍是主要的治疗手段，然而对于术后复发和转移以及不能手术的晚期病人，手术以外的其它治疗就显得尤为必要。化疗虽是一种重要的辅助治疗方法,但出于肿瘤的耐药性以及化疗药物的严重副作用，其应用受到一
