阳痿肾阳虚证症状规律及其转录组特征研究

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1、ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine(基础医学院)二0一一届博士研究生学位论文阳痿肾阳虚证症状规律及其转录组特征研究ResearchontheTranscriptomeFeaturesandSymptomPatternofKidney-YangDeficiencySyndromeSufferringfromErectileDysfunction研究生姓名:于宏波指导教师:严石林教授学科专业:中医诊断学二○一一年四月学位论文阳痿肾阳虚证症状规律及其转录组特征研究于宏波指导教师姓名:严石林教授申请学位级别:博士专业名称:中医诊断学论文提交

2、时间:2011年4月论文答辩时间:2011年5月本论文受以下项目资助:1.国家自然科学基金项目(NO:30873237,基于Ras-MAPK通路研究肾阳虚证之异病“同证异治”)2.成都中医药大学优秀博士研究生科研创新基金项目二○一一年四月成都中医药大学2011届博士研究生学位论文中文摘要研究目的:⑴借助于现代数据挖掘有关技术,对所查找文献与临床范围内的所有记载阳痿肾阳虚证的症状进行统计分析,以期全面客观地总结阳痿肾阳虚证症状特点及规律,为阳痿肾阳虚证的临床诊断及科学研究提供理论依据。⑵基于基因芯片技术,筛选阳痿肾阳虚证患者的转录组学特征,探讨阳痿肾阳虚证的分子生物学基础。研究方法:⑴文献

3、临床研究:以《中华医典》中所有有关的阳痿肾阳虚证的文献记载资料,中国学术期刊全文数据库中有明确描述有关阳痿肾阳虚证的医案,成都中医药大学附属医院及四川生殖医院调查收集的阳痿肾阳虚证的临床病例为研究对象。将上述搜索筛选出来的资料进行症状规范化处理,并根据数据特点和数据挖掘的技术要求建立相应的规则,构建阳痿肾阳虚证症状数据库(同时对典型非肾阳虚证症状也建立数据库,统计分析时作对照用)。运用统计学方法,包括多元回归、频次分析、聚类分析、关联规则等,结合中医药理论,就阳痿肾阳虚证的症状特点及组合规律进行逐层深入的分析。⑵转录组学研究:将临床收集病例中选取的3例典型阳痿肾阳虚证患者和3例健康志愿者

4、,采用基因芯片技术,探讨阳痿肾阳虚证患者的转录组学特征。抽取实验者空腹静脉血10ml,裂解红细胞,分离获得白细胞,Trizol法提取总RNA。将总RNA进行IVT体外扩增,采用cy-3标记扩增后的cDNA,单标法与agilent4*44k人类全表达谱芯片进行杂交,洗脱、干燥、数据提取、归一化处理。SAM软件挑选差异基因,cutoff范围:P≤0.01,FC≥2。研究结果:⑴通过数据挖掘并结合其它统计分析方法,提取了阳痿肾阳虚证22个最常见症状,并依据统计数据将其排序。这些症状可分为3类:主症4个:阳痿、腰膝酸痛、畏寒肢冷、舌脉(舌质淡胖苔白滑、脉沉细无力);次症7个:体倦乏力、精神萎靡、

5、腰背发冷、夜尿频多、头晕目眩、性欲减退、面色淡白;一般症状12个:尿后余沥、滑精、不育、纳差食少、遗精、阴冷、脘腹疼痛、大便溏稀、脘腹胀满、精寒、精少、消瘦。⑵阳痿肾阳虚证患者的转录组学研究,筛选出1396个差异表达基因;这些1成都中医药大学2011届博士研究生学位论文基因的异常表达,与阳痿肾阳虚证患者的主要症状体征密切相关。这些基因主要涉及:蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物、调节代谢过程、细胞内的细胞器、大分子代谢过程、转录调节活性、核糖复合物、分子功能的调控、T细胞的选择、转录辅活动、正负代谢调控过程、生物合成过程、多细胞有机体的动态平衡、生长调控,细胞代谢过程、病毒的繁殖过程、白细胞

6、激活,等等。在差异表达基因中,10个蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物相关基因表达最为突出,其中5个基因上调,5个基因下调。差异基因涉及多种功能蛋白和代谢通路。主要涉及的信号转导通路有:Alzheimer's病、代谢途径、N-糖链的合成、泛素介导的蛋白质降解、Wnt信号通路、胰岛素信号转导通路、RIG-I型样受体信号转导通路、MAPK信号转导通路、神经营养因子信号转导通路、钙信号转导通路。上述异常表达基因及相关信号通路,提示阳痿肾阳虚证患者性激素代谢低下、能量合成不足、物质代谢与免疫功能紊乱等,与其主要症状体征密切相关。研究结论:⑴通过对古籍文献、医案及临床调查病例研究,初步揭示了阳痿肾阳虚

7、证的症状特点规律,提出了阳痿肾阳虚证的参考诊断方法。完善了对阳痿肾阳虚证中医证候的认识。⑵通过转录组学研究实验研究,发现10条蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物相关基因表达最为突出,其中5条基因上调,5条基因下调。这与以往相关研究有一定区别,这也许能够解释阳痿肾阳虚证的发生可能与蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物具有密切关系。⑶阳痿肾阳虚证的病理生理过程复杂,涉及多种功能蛋白和代谢通路。在相关信号通路中,涉及多种信号途径,提示阳痿肾阳虚证的

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