7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究

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1、7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究我国的中草药资源非常丰富，我国劳动人民应用中药已有数千年的历史，许多中草药具有抗菌消炎的作用。该课题组在前期研究的基础上，筛选出地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种常见中草药，用95%酒精提取其活性成分，选取大肠杆菌、枯草杆菌菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等常见污染菌作为靶标菌，通过抑菌、杀菌试验，检测中草药对靶标菌的作用效果，为开发绿色杀菌剂提供参考。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　1.1.1　　供试中草药。地榆（R

2、adixsanguisorbae）、苍术（Atractylodesrhizome）、紫花地丁（Violaeherba）半枝莲（Portulacagrandiflorahook）、大黄（Rheumpalmatum）、枸骨（Ilexcornuta）、千里光（Senecioscandens），以上7种中草药均购买于咸宁市温泉中药店，烘干备用。　　1.1.2　　供试菌种。枯草杆菌（Bacillussubtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）、酵

3、母菌（Saccharomycescerevisiae），上述菌种均由华中农业大学发酵工程室提供。　　1.2试验仪器和试剂　　1.2.1　　试验仪器。DH5000AB型电热恒温培养箱、Sdash;CJ1D型单人超净工作台、YX280A手提式不锈钢消毒器、J2菌落计数器、DH-101电热恒温本文由.L.收集整理鼓风干燥箱、84Ⅱ型加热磁力搅拌器、BCD216荣事达冰箱。　　1.2.2　　试验试剂。1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

4、1.3试验方法　　1.3.1　　菌悬液的配制。将大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，37℃培养24h；酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，28℃培养48h。　　将培养好的菌种，分别用接种环挑取少许菌体于装有无菌水的试管内，震荡均匀，制成菌悬液。用平板菌落计数法测定其菌液浓度，并用稀释法，使菌液含量数为104cfu/ml，即为供试菌液。　　1.3.2　　中草药提取液的配制。　　将中草药烘干、粉碎，分别用95%酒精[1]常温下萃取4d[2]，将提取液离心后，减压蒸馏温度约为50～52℃

5、，将中草药提取液中的酒精蒸发。然后用蒸馏水定容到质量浓度为1g/ml，置于0～4℃冰箱中备用。　　1.3.3　　体外抑菌试验测定[3]。将固体培养基加热熔化，每20ml固体培养基加入已装有预定量中草药提取液（0.5、2.0ml）的无菌培养皿（直径为15mm）中，再加入0.2ml菌液（稀释后菌液浓度约为103个/ml），用涂布器涂布均匀，每一处理重复3次，用无菌水作对照。上述操作均在超净工作台内进行。将细菌培养皿倒置，置36～37℃恒温培养24h，将酵母菌培养皿置恒温箱中28℃恒温培养48h后统计菌落个数，计算抑菌

6、率[4]。抑菌率=（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数100%。　　1.3.4　　体外杀菌试验测定。试验时，菌悬液的浓度约为104cfu/ml。取0.5ml菌悬液和4.5ml提取液于无菌小试管中混合均匀（对照组为无菌水），作用至预定时间（5、15min）后，取0.2ml菌药混合液接种到装好培养基的培养皿中，用涂布器涂布均匀，每次操作重复3次。将做好的细菌平板倒置放入36～37℃恒温培养箱中培养24h后，将酵母菌培养皿置恒温箱中28℃恒温培养48h后统计菌落个数，统计菌落个数，计算杀菌率[5]。　　杀菌率=（对照

7、菌落数-处理菌落数）/对照菌落数100%。　　2结果与分析　　2.17种中草药酒精提取液的抑菌试验　　由表1可见，7种中草药的酒精提取液对4种菌有明显的抑制效果。随着药物剂量的增大，对4种菌的抑制效果显著增强。在药物为2.0ml时，中草药对枯草杆菌的抑菌作用大小依次为大黄>枸骨>千里光>苍术>紫花地丁>半枝莲>地榆，大黄抑菌率为99.4%，效果最好；中草药对酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌能力最强，抑菌率为91.5%；中草药对大肠杆菌的抑菌作用大小依次为地榆&g

8、t;苍术>大黄>半枝莲>紫花地丁>千里光>枸骨，地榆抑菌率最高，为97.2%；中草药对金黄色葡萄球菌的抑菌作用大小依次为大黄>地榆>枸骨>千里光>苍术>半枝莲>紫花地丁，大黄抑菌率为88.3%，效果最好。综合抑菌率看，7种中草药提取液对酵母菌抑菌率均较高。　　抑菌试验表明，同一中草药对不同细菌的抑制作用亦存