峨眉产味连指纹图谱研究

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1、峨眉产味连指纹图谱研究蒋合众，马超英，刘军，林琳，吴晓青【关键词】峨眉产味连；指纹图谱；高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishasensitiveandspecificHPLCmethodforthequalitycontrolofEmei'sCoptischinensisFranch.MethodsThechromatographicfingerprintofEmei'sCoptischinensisFranchodeatographicseparation,datailarityevaluationSoftilarityofsamples

2、.ResultsTheHPLCfingerprintofEmei'sCoptischinensisFranchinarily,shoeofchemicalstandards,peak6,8and9atineandBerberine.ConclusionTheHPLCfingerprintmethodisrepeatableandcanbeusedforqualitycontrolofEmei'sCoptischinensisFranch.　　Keyei'sCoptischinensisFranch；Fingerprint；HPLC　　峨眉产味连为四川著名道地药材，来源于毛茛科植物

3、黄连CoptischinensisFranch（习称“味连”）的根茎，秋季采挖，除去须根及泥沙，干燥，去除残留须根〔1〕。味苦、性寒，入心、肝、胃、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒的功能，是一种临床应用广泛的清热燥湿解毒药，常用于湿热痞满、呕吐、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、牙痛、消渴及痈肿疔疮；外治湿疹、湿疮、耳道流脓、中耳炎等肿疡类疾病〔2～4〕。味连根茎的主要成分为药根碱(jatrorrhizine)、黄连碱(coptisine)、巴马汀(palmatine)、小檗碱(berberine)、伪小檗碱(epiberberine)等季胺型生物碱〔5〕。其中小檗碱含量最高，约5%

4、～8%，一般用这些生物碱在生药中的含量来评价黄连的质量，但单一成分难以反映黄连的整体特征，建立简便可行的指纹图谱方法是目前更好评价黄连质量的有效方法，也是中药标准化的一项重要内容。目前色谱指纹图谱技术已成为中药质量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色谱法，对四川峨眉产味连GAP基地主要产地（四川峨眉山市龙池镇）的样品进行研究，制定出峨眉产味连的指纹图谱。　　1仪器与试药　　1.1仪器岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，CLASS-VP色谱工作站；色谱柱：m×250mm）。　　1.2试剂乙腈、甲醇为色谱纯（天津科密欧公司），水为超纯水（实验室自制），其他试剂为分析纯。　　

5、1.3对照品盐酸小檗碱（批号110713-200208，供含量测定用）、盐酸巴马汀（批号0732-200005，供鉴别用）和盐酸药根碱对照品（批号0733-200005，供鉴别用）均由中国药品生物制品检定所提供。　　1.4样品　　味连根茎，生长年限为4年，采集时间2004-12，采集地点为峨眉龙池，经西南交通大学药学院宋良科副教授鉴定为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch（味连），经低温干燥，粉碎，过60目筛备用。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；色谱柱：m×250mm）；流动相：乙腈-磷酸二氢钾溶液（0.033mol

6、/L，磷酸调pH=2.6）为流动相梯度洗脱，流速1.0ml/min，梯度洗脱条件见表1；检测波长268nm；柱温30℃；进样量：供试品和对照品各10μl。表1味连指纹图谱流动相梯度洗脱条件（略）　　2.2对照品溶液的制备　　分别精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品各约0.001g，加甲醇溶解并定容至10ml，制成浓度为0.1mg/ml的标准混合溶液，待用。　　2.3供试品溶液的制备　　精密称取峨眉产味连样品粉末约0.1g，用甲醇（含1%盐酸）溶解味连样品并定溶于25ml容量瓶中，于60℃加热15min，超声萃取30min，静置过夜，用甲醇补足减少的溶液至刻度，用0.4

7、5μm微孔滤膜过滤，待用。　　2.4方法学考察　　2.4.1样品稳定性考察　　取同一份峨眉产味连供试品溶液分别在0，1，2，4，8，12，24，48h不同时间点进行检测，用相似度软件（中国药品生物制品检定所中药室提供的《中药色谱图分析和数据管理系统》）考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.905935，表明味连样品供试品溶液在48h内稳定。　　2.4.2仪器精密度考察　　取同一份峨眉产味连供试品溶液连续进样5次，考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.927432，表明仪器精密