峨眉产味连指纹图谱研究论文

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1、峨眉产味连指纹图谱研究论文蒋合众，马超英，刘军，林琳，吴晓青【关键词】峨眉产味连；指纹图谱；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToestablishasensitiveandspecificHPLCmethodforthequalitycontrolofEmei'sCoptischinensisFranch.MethodsThechromatographicfingerprintofEmei'sCoptischinensisFranchodeatographicseparation,datailarityEva

2、luationSoftilarityofsamples.ResultsTheHPLCfingerprintofEmei'sCoptischinensisFranchinarily,shoeofchemicalstandards,peak6,.freelatineandBerberine.ConclusionTheHPLCfingerprintmethodisrepeatableandcanbeusedforqualitycontrolofEmei'sCoptischinensisFranch.Keyei'sCoptischin

3、ensisFranch；Fingerprint；HPLC峨眉产味连为四川著名道地药材，来源于毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch（习称“味连”）的根茎，秋季采挖，除去须根及泥沙.freelatine)、小檗碱(berberine)、伪小檗碱(epiberberine)等季胺型生物碱［5］。其中小檗碱含量最高，约5%～8%，一般用这些生物碱在生药中的含量来评价黄连的质量，但单一成分难以反映黄连的整体特征，建立简便可行的指纹图谱方法是目前更好评价黄连质量的有效方法，也是中药标准化的一项重要内容。目前色谱指纹图谱

4、技术已成为中药质量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色谱法，对四川峨眉产味连GAP基地主要产地（四川峨眉山市龙池镇）的样品进行研究，制定出峨眉产味连的指纹图谱。1仪器与试药1.1仪器岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，CLASS-VP色谱工作站；色谱柱：m×250mm）。1.2试剂乙腈、甲醇为色谱纯（天津科密欧公司），水为超纯水（实验室自制），其他试剂为分析纯。1.3对照品盐酸小檗碱（批号110713-200208，供含量测定用）、盐酸巴马汀（批号0732-200005，供鉴别用）和盐酸药根碱对照品（批号0733-2

5、00005，供鉴别用）均由中国药品生物制品检定所提供。1.4样品味连根茎，生长年限为4年，采集时间2004-12，采集地点为峨眉龙池，经西南交通大学药学院宋良科副教授鉴定为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch（味连），经低温干燥，粉碎，过60目筛备用。2方法与结果2.1色谱条件岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；色谱柱：m×250mm）；流动相：乙腈-磷酸二氢钾溶液（0.033mol/L，磷酸调pH=2.6）为流动相梯度洗脱，流速1.0ml/min，梯度洗脱条件见表1；检测波长268nm；柱温30℃；进样

6、量：供试品和对照品各10μl。表1味连指纹图谱流动相梯度洗脱条件（略）2.2对照品溶液的制备分别精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品各约0.001g，加甲醇溶解并定容至10ml，制成浓度为0.1mg/ml的标准混合溶液，待用。2.3供试品溶液的制备精密称取峨眉产味连样品粉末约0.1g，用甲醇（含1%盐酸）溶解味连样品并定溶于25ml容量瓶中，于60℃加热15min，超声萃取30min，静置过夜，用甲醇补足减少的溶液至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，待用。2.4方法学考察2.4.1样品稳定性考察取同一份峨眉产味连供

7、试品溶液分别在0，1，2，4，8，12，24，48h不同时间点进行检测，用相似度软件（中国药品生物制品检定所中药室提供的《中药色谱图分析和数据管理系统》）考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.905935，表明味连样品供试品溶液在48h内稳定。2.4.2仪器精密度考察取同一份峨眉产味连供试品溶液连续进样5次，考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.927432，表明仪器精密度良好。2.4.3重复性实验取同一批峨眉产味连样品，按“2.3”项下供试品制备方法分别制备5份供试品，同法检测，考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.9

8、77846，表明本法测定的重复性良好。2.5指纹图谱的建立精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，分别按“2.1”项下色谱条件测定。经过详细分析比较多批次味连样品的色谱图所给出的峰数、峰面积和相对保留时间等相关参数，确定9个特征峰构成峨眉产味连的指纹图谱，为方