中、重症呼吸道合胞病毒感染小鼠模型的实验探究论文

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1、中、重症呼吸道合胞病毒感染小鼠模型的实验探究论文.freell；对照组每侧鼻孔给予0.1ml的1640维持液。1.2.3标本的采集于感染后第3、5、7、9d处死小鼠。无菌条件下取出肺组织，左肺一部分用10％中性福尔马林固定，石蜡包埋制成切片，作HE染色观察肺组织病理改变，另一部分用4％戊二醛固定，用于透射电子显微镜下观察肺组织超微结构的改变；右肺置于灭菌Hank’s液中，用于病毒分离。1.2.4肺组织病毒分离无菌条件下取出的肺组织称重后用hank’s液洗2次，按10ml/g加入Eagle液，剪碎新鲜的肺组织标本，研磨后离心5min，收集上清，接种到Hep-2细胞中，

2、观察细胞病变，待细胞融合病变“++”时，记录结果。1.2.5光镜标本结果判定及统计学处理做肺横切面连续切片，每隔100μｍ取切片1张，共取3张。置网格目镜测微尺在400倍镜下，每张切片取10个视野，计数切片上肺泡炎0～Ⅳ级方格数及每张切片内全部支气管数和炎性细胞浸润的支气管数，数据取3张切片的均数。参照Szapiel［1］提供的肺泡炎分级，0～Ⅳ级病变确定如下：0级为无肺泡炎；Ⅰ级为肺泡壁间质水肿，毛细血管充血致肺泡壁轻度增厚；Ⅱ级为肺泡壁中度增厚，肺泡腔变小；Ⅲ级为肺泡壁重度增厚，肺泡腔狭小或膨大；Ⅳ级为肺实变。计数资料用率表示，组间比较采用方差分析。2结果2.1

3、病毒效价：在96孔板中滴定病毒效价为104TCID50。2.2肺组织病毒分离：实验Ⅰ、Ⅱ组第5d病毒分离阳性率分别为83.3％、66.8％，第7d分别为62.5％、40.5％，第5、7d实验Ⅰ、Ⅱ组病毒分离阳性率相比分别有显著差异（P0.01）。2.3病理检查结果2.3.1实验Ⅰ组光镜下肺泡出现典型的间质性肺炎表现，肺泡壁明显增厚，毛细血管扩张充血，有较多的淋巴细胞浸润，肺泡腔明显狭窄（见封四图1），病变以感染后第5d最显著，此时Ⅲ级炎症占绝大多数，炎性细胞浸润支气管数接近全部，第7d炎症开始减轻，第9d炎症明显好转，以Ⅰ、Ⅱ级炎症为主，炎性细胞浸润支气管数明显减少

4、，与实验Ⅱ组相比有显著差异（P0.05）。见表1。电镜下可见肺泡Ⅰ型上皮细胞肿胀（见封四图2），形成水泡样，并坏死或脱落；肺泡隔有水肿，淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞浸润；毛细血管内皮细胞肿胀，形成大小不等的囊泡，有的形成窗隔样裂隙，在病变严重的肺泡腔内，可见富含蛋白的渗液，各种炎症细胞和红细胞；肺泡Ⅱ型上皮细胞肿胀。2.3.2实验Ⅱ组表现为间质性肺炎，病变过程与实验Ⅰ组相似，但病变程度有所减轻，光镜下病理改变及电镜下超微结构的病变亦轻于实验Ⅰ组。见表1。3讨论用RSV滴鼻能感染多种动物，如纯系小鼠、大鼠、棉鼠、豚鼠、雪貂和黑猩猩等。而BALB/c小鼠，由于其确定

5、的基因，易于处理等优点，适用于免疫学、疫苗的研制等方面，被认为是研究RSV感染的最常用的动物模型［2］，人类RSV毒株经鼻滴入BALB/c小鼠后，很容易感染小鼠肺组织，而且其感染的时间进程、病理表现与人体非常相似［3］。表1两实验组各级肺炎面积构成比及炎性细胞浸润支气管百分数比较建立RSV感染动物模型，要求病毒对照组有尽可能高的发病率，并且建立的模型其肺组织病变程度与正常相比要有一定的下降空间，因此筛选适当的接种病毒浓度十分重要。目前常用的造模浓度多为100TCID50RSV液，但是临床中的RSV感染轻重不一，严重者引起呼吸衰竭，甚至死亡等严重后果，因此建立中、重症

6、的RSV感染模型有较大的临床意义。本研究采用RSV原液（TCID50为10-4.2/100μl）及100TCID50RSV液建立模型，结果显示2组小鼠肺组织均可分离出RSV病毒，但实验Ⅰ组（RSV原液组）的病毒分离率明显高于实验Ⅱ组（100TCID50组），而且实验Ⅰ组的肺组织病变程度重于实验Ⅱ组，因此用RSV原液更适合于建立中、重症RSV感染模型。本研究显示RSV感染后3d内病毒仅存在于上呼吸道，尚未侵及肺组织，第5d肺组织病变最重，此时病毒复制处于高峰期，感染9d后病变明显减轻，与以往的研究相似［4］。综上所述，用RSV原液可以成功地建立中、重症RSV感染的动物

7、模型，可以用于RSV感染的发病机制及治疗的研究。