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时间:2018-11-22
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1、麦芽糖化力的测定(一):实验室测定麦芽糖化力(酵素力)是检测麦芽质量的一个重要参量,他是麦芽α-淀粉酶和β-淀粉酶二者活力之和,是反应麦芽总的分解淀粉能力,决定酶化过程中使用输料比例的依据。一、实验原理:淀粉经糖化酶水解生成葡萄糖,葡萄糖具有还原性,其羧基易被若氧化剂次碘酸钠所氧化I2+2NaOH=NaIO+NaI+H2ONaIO+C6H12O6=NaI+CH2OH(CHOH)4COOH+NaI体系中加入过量的碘氧化反应完成后用硫代替硫酸钠滴定过量的碘,即可算出糖化力I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2
2、NaI二、仪器与试剂仪器:吸管(25ml.5ml.2ml.10ml),容量瓶200ml2个,250ml碘量瓶试剂:2%可溶性淀粉溶液,乙酸一乙酸缓冲溶液,麦芽浸出液,1mol/L的氢氧化钠溶液,0.1mol/L碘溶液,1mol/L的硫酸溶液,0.1mol/L硫代硫酸钠溶液。三、实验步骤实验分为三步骤,即麦芽糖化的制备,空白实验的制备以及碘量法定糖;1、麦芽糖化液的制备量取2%可溶性淀粉溶液100ml,置于200ml的容量瓶中。加10ml乙酸一乙酸缓冲溶液,摇匀,在20℃水浴中保温20分钟。准确加入5.00ml
3、麦芽浸出液,摇匀,在20℃水浴中准确保温30分钟,立即加入1mol/L的氢氧化钠溶液4ml,震荡,以终止酶的活动,用水定容至刻度。2、空白实验的制备量取2%可溶性淀粉溶液100ml,置于200ml的容量瓶中。在20℃水浴中保温20分钟后,加入1mol/L的氢氧化钠溶液2.35ml,摇匀,准确加入5.00ml麦芽浸出液,用水定容至刻度。3、碘量法定糖吸取麦芽糖化液和空白实验液各50.00ml,分别置入250ml碘量瓶中,各加入0.1mol/L碘溶液25.00ml,1mol/L的氢氧化钠溶液3m摇匀,盖好,静置1
4、5分钟。加1mol/L的硫酸溶液4.5m,立即用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色失为终点。四、数据记录实验记录表项目糖化液空白液次数123123取样毫升数/ml滴定消耗亚硫酸钠毫升数/ml平均值/mlV=V=五、结果计算:麦芽糖化力是以100g无水麦芽在20℃,ph4.3条件下分解可溶性淀粉30min产生1g麦芽糖为一个唯科(WK)糖化力单位麦芽糖化力(WK)=(V0-V)C×34.2÷(1-M)×100式中V0-空白液消耗亚硫酸钠标准溶液的毫升数V-麦芽糖化液消耗亚硫酸钠标准溶液的毫升数C-亚硫酸钠
5、标准溶液的摩尔浓度数M-麦芽水分百分含量34.2-换算系数(二)生产中测定用SKALAR间隔流动分析仪测定麦芽糖化力用SKALAR间隔流动分析仪(SFA)测定麦芽糖化力(DP)的方法。该方法操作简便,数据重复性好,结果准确,适于大批量的样品分析。一、原理:采用间隔流动技术,试样进入反应器后,被空气泡隔开,在反应器中进行如混匀、加热、渗析等化学处理,最后用分光光度计检测。1 材料与方法11 SFA分析DP的原理麦芽浸出液进入反应器后,与淀粉溶液反应,水解淀粉生成的还原糖在碱性条件下与铁氰化钾发生氧化还原反应,F
6、e3+变成Fe2+,颜色变浅,在420nm下测光密度,根据光密度的变化即可计算出DP值。测定的主要反应如下:RCHO+2Fe(CN)36+2OH-→RCOOH+2Fe(CN)4-6+H2O12二、主要药品121 Brij35(30%) 淀粉(直链) 铁氰化钾 醋酸(100%) 醋酸钠 碳酸钠 氯三、主要仪器SKALAR间隔流动分析仪分析天平四、试验方法1、麦芽浸出液的制备:称取10克经粉碎的无水麦芽于500ml容量瓶中,加入200ml5%的NaCL20℃保温2小时,每隔20分钟搅拌一次,及时过滤使用。
7、2、SFA分析法麦芽浸出液混合NaCl溶液35℃水浴反应淀粉溶液95℃氧化还原比色(420nm)碱性铁氰化钾溶液计算公式:可知,仪器分析与常规分析的MaxㄧXi-Xㄧ≤3δ,因此,各自的X都可以做为测量值,仪器分析的δ/X≤0.01,而常规分析的δ/X≥0.05,这说明仪器分析比常规分析的稳定性要好的多。为了检测仪器分析的准确性,若以常规分析结果作为真实值,仪器分析结果的相对标准差为(307.85-293.8)/293.8=4.77%<9%。由于测定麦芽糖化力的允许相对标准差为9%因此可以把仪器分析结果作为测
8、量结果。五、结论1.SFA稳定性好,其δ/X<1%,可大大减少人为原因造成的误差。2.SFA操作简单,使用方便,节省了人力与物力。非常适合于工厂大批量的样品分析。3.应用SFA做分析,要注意精确配置标准液。所有试剂不允许有悬浮物或沉淀物存在,否则,重配置或过滤后再使用。4.应用SFA的过程中,维护与保养时关键,每次使用前后,必须做好清洗工作。5.由于麦芽中各淀粉酶的比例不同,测量不同麦芽品种的糖化力
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