盾叶薯蓣辐射株系抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析论文

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1、盾叶薯蓣辐射株系抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析论文谢彩侠1，祝侠丽，高山林，白雨，白雁【摘要】目的提高盾叶薯蓣药材的品质。方法通过组织培养，对辐射诱变获得的盾叶薯蓣株系进行了抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析。结果经诱变获得的株系SOD、POD比活力和APX活性与对照株系相比差异很大，大部分辐射诱变株系薯蓣皂苷元含量都超过了对照株系，但试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元含量相关性不明显。结论经诱导获得的辐射诱变株系在清除活性氧能力及有效成分含量方面与对照表现出明显差异.freelg/L+PP3330.5mg/L培养基上分化的丛生牙

2、作为幅射材料。1.2仪器和试剂BECKMANDU-600分光光度计，水浴锅，微量加样器。酶提取液：pH7.5的0.05M的Tris-HCl缓冲液，PBSpH(7.0)，0.1mmol/LEDTA，0.1mmol/LH2O2，0.5mmol/LASA，丙酮，SOD试剂盒(购于建成生物试剂研究所)。2方法2.1辐照株系的建立用不同剂量的钴60辐照盾叶薯蓣的丛生芽，30d后统计存活率，对存活芽进行扩大繁殖，并淘汰长势较弱，生长畸形的植株。2.2SOD，POD，APX活性的测定精密称取生长30d的辐照株系与未辐照株系试管苗新鲜叶片

3、1.0g，每份材料加5ml预冷的提取缓冲液(pH7.5的0.05mol/LTris-HCl缓冲液)及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4℃冷冻离心机6000r/min离心10min，上清液即为酶提取液。SOD活性按试剂盒说明书操作。POD总活力按文献1的方法进行，酶的比活力用ΔOD470/(mg·min)(protein)表示。APX活性参照文献1的方法，酶活单位定义为每小时氧化μmolASA的酶量为一个酶活单位。2.3盾叶薯蓣试管苗薯蓣皂苷元含量分析2，3盾叶薯蓣试管苗在MS/2+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L培

4、养基上诱导生根，待苗长至30～35d左右，洗净根上的培养基，将根剪掉，在60℃下烘干，粉碎，过60目筛，供含量分析用。2.3.1薯蓣皂苷元的测定供试品溶液制备：精密称取盾叶薯蓣粉末0.7～1.0g，置于三角瓶中，加2.0mol/L的硫酸50ml，在100℃水浴锅中水解4h，放冷过滤，药渣用蒸馏水洗至中性，60℃干燥后，用石油醚(60～90℃)50ml在90℃水浴中索氏提取5h，提取液回收至干后用无水乙醇溶解，过滤至5ml的容量瓶中，用无水乙醇定容待测定。对照品溶液制备：准确称取薯蓣皂苷元标样0.001g，置2ml容量瓶中，

5、用无水乙醇溶解，稀释至刻度，得0.5μg/μl的标准溶液备用。2.3.2色谱条件选择仪器：Agilent1100Series分析条件：Microsorb-MV100C18(5μm，4.6mm×250mm)。无水甲醇为流动相，进样量20μl，流速0.5ml/min，检测波长203nm,柱温为室温。样品中薯蓣皂苷元与其它成分达到良好分离(见图1～2)。样品含量测定：以上述色谱条件对盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量进行分析，并计算其含量。2.3.3样品含量测定以上述色谱条件对盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量进行分析，并计算其含量。2.4盾叶薯蓣

6、部分辐射诱变株系一年生苗薯蓣皂苷元含量分析将辐射诱变株系试管苗在其试管苗在MS/2+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导生根，待根长至3～4cm左右将试管苗移出培养室。在室温下开瓶加入少量水保湿，炼苗1～2d。将试管苗取出，小心洗去苗上的培养基。傍晚时分，将苗栽入以蛭石和复合肥为基质的苗床中，每日中午喷雾2h保湿，30d后移栽到大田中，使其在自然条件下生长1年，挖取地下根茎,去除泥沙、切片、在60℃干燥至恒重，粉碎过60目筛,.freel.北京：高等教育出版社,2006：168.2王俊，杨克迪，陈钧.均匀

7、设计法优选穿山龙的水解工艺条件J.中药材，2002，9：659.3谢彩侠，高山林，朱丹妮，等.盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元不同提取方法的比较J，植物资源与环境学报，2005，14(1)：23.4於丙军，刘友良.盐胁迫对一年生盐生野大豆幼苗活性氢代谢的影晌J.西北植物学报，2003，23(1)：18.