浅析纤维调节素在大鼠正常牙周组织中的免疫化学定位和表现

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1、浅析纤维调节素在大鼠正常牙周组织中的免疫化学定位和表现-->浅析纤维调节素在大鼠正常牙周组织中的免疫化学定位和表现【摘要】　目的研究纤维调节素(fibromodulin)代写医学论文在正常牙周组织中的分布和表现,以明确纤维调节素在牙周组织自身稳定中的作用。方法　用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应技术,对正常LeRNA表现进行分析。结果　纤维调节素在靠近口腔牙龈面的区域和牙周韧带-牙槽骨、牙周韧带-牙骨质界面有强阳性表现;核心蛋白聚糖强阳性表现于牙龈组织龈沟附近的区域;双糖链蛋白聚糖则在牙龈上皮着色明显。从mRNA的表现可以看出,纤维调节素,核心蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖在成骨细

2、胞中强烈表现,其蛋白密度是其他两种细胞的1~3倍;Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA在牙龈成纤维细胞中表现水平较高,其蛋白密度是其他两种细胞的1·5倍以上。结论　纤维调节素可能与其他小蛋白多糖相互作用,调节胶原纤维的网络形成,并可能参与牙槽骨和牙骨质矿化。【关键词】　胶原;　牙周组织;　免疫组织化学蛋白多糖是一组普遍存在于连接组织中的大分子糖蛋白,它们作为基质结构的组成成分定位于基质内,以及细胞表面和细胞器内[1]。纤维调节素(fibromodulin)是细胞外基质富含亮氨酸的蛋白多糖家族中的一员。牛的纤维调节素的氨基酸序列显示与同家族的蛋白多糖核心蛋白聚糖(decorin)和双糖链蛋白

3、聚糖(biglycan)非常相似[2]。已经有充分证据说明,纤维调节素在胶原纤维上有规律地分布,参与胶原纤维网络形成的调节,并能与Ⅰ型、Ⅱ型等胶原相互作用[3]。纤维调节素也能与转化生长因子-β(transforminggrog/100g)处死大鼠,分离下颌第一磨牙及其周围的牙槽骨、覆盖的牙龈组织。组织块经4%多聚甲醛固定,10%EDTA脱钙,常规脱水,包埋,切片。HE染色显示组织学表现。2.免疫组织化学染色:按以前描述过的方法对组织切片进行免疫组织化学染色[5]。抗纤维调节素抗体由美国Tampa大学AHKPlass教授赠送,1∶2000稀释;抗biglycan,抗decori

4、n,抗Ⅰ型胶原,抗Ⅲ型胶原抗体,均由美国Maryland国家卫生研究院LEM培养基中[6,7],并加入胎牛血清,青霉素,链霉素以及非必需氨基酸。实验所用细胞为第四到第八代。4.逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR):按以前描述过的方法从培养的细胞中提取总RNA,运行RT-PCR程序,所得产物在2%琼脂糖凝胶中电泳[8],用NIH1·57软件对电泳结果进行密度测定。选用的引物序列为:纤维调节素5′-AGCCTCATCGAGATCTGA-3′和5′-GGAGTGGGT-GAAGTGGA-3′,微球蛋白5′-CCCCCACTGAAA-AAGATGAG-3′和5′-TCATCCAATC

5、CAAATGCGGC-3′,decorin5′-GATCACCAAAGTGCGAA-3′和5′-CCAGAGAGCCATTGTCA-3′,biglycan5′-TGGAGA-ACAGTGGCTTTGAAC-3′和5′-TTCTCGATCATC-CTGATCTGG-3′,Ⅰ型胶原5′-GTGGGC-TTCCTGGTGA-3′和5′-CTTTGGAGCCAGCTGGA-3′,Ⅲ型胶原5′-GGTACTCCTGGTCTGCA-3′和5′-GAAGCC-AGCAGCACCA-3′。这些引物的PCR循环次数,变性温度退火温度,延长温度和时间为:纤维调节素和decorin,33次,94℃1

6、min,50℃30s,72℃1min;微球蛋白33次,94℃1min,60℃30s,72℃1min;biglycan35次,94℃1min,55℃2min,72℃3min;Ⅰ型胶原α2和Ⅲ型胶原α1,31次,94℃1min,55℃2min,72℃3min。结果1.在牙龈组织中的分布:纤维调节素在牙龈上皮和牙龈连接组织有特别的分布(表1)。在牙龈上皮的口腔面,基底上层角质形成细胞对纤维调节素中度着色。树突状细胞也有明显的阳性着色。与之对比,龈沟上皮和结合上皮的鳞状角质形成细胞层和非角质形成细胞着色较弱。而在基底细胞层,基底角质形成细胞和基底细胞膜无纤维调节素阳性表现。Ⅲ型胶原在牙

7、龈上皮的分布与纤维调节素类似。biglycan也有类似表现,但它在牙龈上皮表现更强。decorin却不同,它在牙龈上皮基底膜区着色浓密。Ⅰ型胶原在牙龈上皮表现较弱。在牙龈连接组织,牙龈成纤维细胞和牙龈连接组织基质对纤维调节素有很强的着色。纤维调节素在牙龈上皮下方靠近口腔面的区域,着色明显强于靠近牙面的区域。Ⅰ型胶原在牙龈连接组织中的分布与纤维调节素相似。与Ⅰ型胶原比较,Ⅲ型胶原在牙龈连接组织中数量较少。其他两种蛋白多糖在牙龈组织中显示与纤维调节素不同的细胞和基质分布形式:decorin和bi