hplc法在诺氟沙星含量测定中的应用

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1、HPLC法在诺氟沙星含量测定中的应用迭宁杨述凡营口市药品检验所115000摘要：目的：建立HPLC（高效液相色谱）法诺氟沙星含量的测定方法。方法：釆用HPLC法，Dionex色谱柱C18（5μ,250×4.6mm），流动相为甲醇，流速为1.0ml?min-l，检测波长为285nm。结果:诺氟沙星在0.20053mg?mL〜2.0053mg?mL之间时出现良好的线性关系，r=0.9996:平均回收率达到99.85%,检测限达到0.005ngo结论：HPLC法操作简便、精准快速、重复性高，可以被用以有效控制诺氟沙星的质量。关键词：诺氟沙星HPLC（高效液相色谱）含量测定诺氟沙星

2、（C16H18FN3O3）属于氟喹诺酮类抗菌药，其广谱抗菌药效，特别是对需氧革兰阴性杆菌只有非常高的抗菌活性。诺氟沙星对体外多重耐药菌也具有非常好的抗菌活性。由于其木身在临床上具有很好的应用价值，所以诺氟沙星含量的测定始终是医学界的一个关注点。截至目前，对其含量的测量方法有很多种，但是这些方法存在明显的缺点。木试验选用的是美国戴安（Dionex）C18色谱柱，流动相选用的是甲醇（用盐酸进行酸化，使pH为2.5）,用紫外可见检测器，对诺氟沙星胶囊中的诺氟沙星含量进行了测定。最后发现，此方法操作简便、精准快速、重复性高，可以被用以有效控制诺氟沙星的质量。1仪器与试药DionexUltiMateT

3、M3000型液相色谱仪，包括UltiMate?3000×2Dual（DGLC）WPS-3000TSL自动进样器，TCC-3100柱温箱，VWD-3400RSVWD紫外可见波长检测器等。流动相：甲醇选用HPLC级，并对其进行浓度为0.1mol?L-1的盐酸酸化，将pH值调为2.5,过滤后待用。诺氟沙星标准溶液：称取定量的诺氟沙星放于50ml的容量瓶中，经调剂好的甲醇超声波震荡搅拌溶解,并待其至室温后，用酸化后的甲醇将其稀释至刻度，浓度为1.0g?L-l。使用吋再结合具体实际将其稀释成各种浓度的工作溶液。试剂采用分析纯，水采用离子水经过二次蒸馏。2色谱条件色谱柱为DionexC18(

4、5μ，250×4.6mm)；流动相甲醇；流速为1.0ml?min-l;检测波长为285nm；柱温为30°C；进样量为20μl。3溶液配制诺氟沙星在有机溶剂中，包括甲醇、丙酮以及乙醚等，都比较容易溶解。若是选用丙酮和乙醚作为溶剂的化，诺氟沙星会出现极性增人现象，保留吋间变短，丙酮为1.16min，乙醚为1.35min,由此不能够有效与样品中杂质峰产生分离。而甲醛的极性刚刚合适，作为溶剂时，虽然色谱峰有严重的拖尾现象，但是在对其盐酸酸化处理后，能够冇效抑制诺氟沙星分子中狻基上氢的离解，形成对称性好、峰形尖锐的色谱峰，如此，诺氟沙星和样品中杂质峰便可有效分离。因此，本实验的

5、流动相选用了经过盐酸酸化处理后的甲醇作为溶剂，同时还有效地避免了样品进样时由于溶液混合而导致的基线波动现象发生。4优化流动相用浓度为0.02g?L-l诺氟沙星标准溶液，严格按照具体实验步骤，对流动相甲醇进行多组实验。实验结果表明：选用甲醇作为流动相时，会出现严重的色谱峰拖尾现象；选用甲醇-水作为流动相吋，由于水的作用，几乎没有产生峰；选用经盐酸酸化处理后的甲醇作为流动相时，形成的色谱峰具有形状规则、面积大、逢高最大的良好效果。此外还发现，保留吋间、峰形与甲醇的酸度存在密切联系，当甲醇的pH小于2.5吋，保留吋间变长，峰形也较规则，但是酸度过高对HPLC系统产生不利影响；当pH值高于2.5吋，

6、峰形会随之变钝，并随着pH值的增大，拖尾现象也愈加严重，保留吋间也越来越短。经过对甲醇的一系列实验，最终选取保留吋间为4.5min，盐酸酸化后pH值为2.5的甲醇为流动相。此外，进样量也会影响色谱峰锋面面积和峰高，后两者与前者成直线正相关。在0~0.2000g?L-l线性之间，进样量为3μL,能够奋效确保检测器在同一感度之下进行精准测定，避免由于感度改变导致的实验误差现象。5线性、重现性试验在实验状态下，分别选取浓度不同的诺氟沙星标准溶液进行进样，并及吋记录各自不同的色谱峰面积和峰高。当诺氟沙星浓度在0〜200mg?L-l之间时，峰面积与其成线性关系，根据实验数值得出冋归方程：A=37

7、567C+3.6458,相关系数为0.9996。按照信噪比S/N=3进行计算，得出限为0.18mg?L-1。诺氟沙星进样量为3μL,而检出量仅为0.56ng。随后，按照相关实验步骤，对20mg?L-1诺氟沙星标准溶液，先后进行10次相同的平行测定，其相对偏差要保持为1.3%。6精准度试验精确称取25mg的诺氟沙星对照品，用流动相甲醇将其稀释至50ml,使浓度达到0.5mg?mL，并同吋备置3份。随后精确