端粒酶和pcna在胃癌组织中的表达意义论文

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1、端粒酶和PCNA在胃癌组织中的表达意义论文【摘要】目的：研究胃癌组织中端粒酶和PA的蛋白表达及其临床病理学意义。方法：采用量子点免疫荧光组织化学方法检测胃癌组织芯片中端粒酶和PA蛋白的表达情况。结果：不同类型的胃癌，端粒酶和PA蛋白的表达具有差异，其中端粒酶在乳头和管状腺癌组与其他类型胃癌相比，差异具有显著性(χ2=5.675，P=0.017);III级组明显高于I～II级组，差异具有显著性(χ2=4.339，P=0.037);Ⅲ～Ⅳ期组显著高于Ⅰ～Ⅱ期组，且差异具有显著性(χ2=6.478.freeldots,QDs)的高敏感性，荧光强和不易猝灭等优势

2、，能够更加准确的检测端粒酶和PA蛋白的表达情况，且量子点所发荧光能够完全与组织自发荧光区分开。1材料和方法1.1胃癌组织芯片资料统计STC1501胃癌组织芯片购自桂林泛普生物技术有限公司，15×10点阵，每点直径约1.1mm，4μm厚，其中包括64例胃癌，6例淋巴瘤和间质瘤，5例正常及炎症等组织，双芯布阵。所有组织均来自临床外科切除标本，未进行放化疗治疗，经10%中性缓冲甲醛固定24h。胃癌患者中男性44例，女性20例，年龄24～83岁，平均58岁。按分期分类：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期32例;有淋巴结转移30例，未转移34例。1.2试剂鼠抗人PA单克隆抗

3、体、兔抗人端粒酶多克隆抗体、生物素化羊抗鼠、兔IgG均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。605nmQDsSA(605nm量子点标记的链霉亲和素复合物)检测试剂盒购自武汉珈源量子点技术开发有限公司。1.3量子点免疫荧光组织化学检测端粒酶、PA蛋白的表达实验方法参照文献进行。4μm厚胃癌组织芯片脱蜡、水化、微波抗原修复、TBS洗涤，封闭缓冲液37℃湿盒孵育30min，滴加PA、端粒酶抗体，37℃孵育2hr，TBST漂洗5min/次×3次，封闭缓冲液37℃湿盒孵育10min，滴加生物素化羊抗鼠IgG(针对PA)或生物素化羊抗兔IgG(针对端粒酶)，37℃湿

4、盒孵育30min，TBST漂洗5min/次×3次，封闭缓冲液37℃湿盒孵育20min，滴加用封闭缓冲液稀释的QDsSA，37℃湿盒孵育30min，TBST漂洗5min/次×3次，滴加缓冲甘油封片剂封片。荧光显微镜下观察，端粒酶、PA蛋白的阳性信号均为红色，阳性面积≥25%时定义为蛋白的阳性表达。2结果端粒酶的阳性部位主要定位于肿瘤细胞胞浆，分布均匀(见图1A)。胃癌患者中有38例端粒酶阳性表达，阳性率为59.4%，但在正常和炎症胃黏膜组织、印戒细胞癌均为阴性表达，两者之间比较，差异均有显著性(P0.05)。端粒酶表达与胃癌临床病理参数的关系见表1所

5、示，端粒酶的阳性表达率与胃癌患者的年龄和性别差异均无显著性(P0.05)，但在乳头和管状腺癌组与其他类型胃癌相比，差异具有显著性(χ2=5.675，P=0.017);病理分级中III级明显高于I～II级，差异具有显著性(χ2=4.339，P=0.037);Ⅲ～Ⅳ期组显著高于Ⅰ～Ⅱ期组，且差异具有显著性(χ2=6.478，P=0.011);淋巴结转移组明显高于未转移组，且两组之间差异有显著性(χ2=7.000，P=0.008)。表1端粒酶和PA的表达与胃癌临床病理因素的关系PA的阳性部位主要在癌细胞细胞核，呈颗粒状及片状分布(见图1B)。有46例胃癌患者P

6、A呈阳性表达，阳性率为71.9%。胃癌临床病理参数的关系见表1，PA蛋白表达阳性率与胃癌患者的年龄、性别、不同病理类型、病理分级和淋巴结是否转移之间均无显著相关(P0.05)，但TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组显著高于Ⅰ～Ⅱ期组，且差异具有显著性(χ2=7.729，P=0.005)。端粒酶和PA在胃癌组织中有32例共同阳性表达，14例共同阴性表达，两者呈显著正相关(r=0.368,P=0.002)。A：端粒酶的表达(×200)B：PA的蛋白表达(×200)图1胃癌中端粒酶和PA的蛋白表达3讨论本研究发现胃癌组织中端粒酶表达阳性率高(阳性率为59.4%)，但在正常和炎

7、症胃黏膜组织、印戒细胞癌均为阴性表达，两者之间比较差异均有显著性，表明端粒酶与胃癌的发生有关;端粒酶在乳头和管状腺癌组与其他类型胃癌组的表达，差异具有显著性，表明乳头和管状腺癌与其它类型相比有不同的生物学行为。在本研究中，端粒酶阳性在病理学III级组显著高于I-II级组，并且与高TNM分期和淋巴结转移均显著相关，提示端粒酶阳性有助于胃癌的进展。这均与国内外文献报道相近，如Yang等4发现胃癌与其他人体实体肿瘤一样其端粒酶阳性率较高;Matsutani等5观察癌组织端粒酶活性阳性率明显增高，由此证明端粒酶的表达与胃癌的临床病理参数和恶性程度密切相关，可作为

8、临床诊断的重要标志物。本研究显示，胃癌中PA阳性率为71.9%，显著高于正常和炎