《中药化学实验》word版

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1、“中药化学实验技术”实验教学大纲实验　大黄中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的提取、分离和鉴定一　实验目的和要求：（1）掌握pH梯度萃取法的原理和操作技术。（2）学习硅胶柱色谱法分离精制大黄素。（3）学习离心薄层色谱法、快速制备液相色谱法分离精制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。（4）了解高速逆流色谱法的分离原理和方法。（5）学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。二　实验原理大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄

2、是蓼科植物掌叶大黄（RheumpalmatclmL），药用大黄（R.officinaleBaill）及唐古特大黄（R.tangutiumMaxim.etRegll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。羟基蒽醌苷元主要有下列五种：R1R2名称晶形熔点-H-COOH大黄酸(Rhein)黄色针晶318~320℃-CH3-OH大黄素(Emodin)橙色针晶256~257℃-H-CH2OH芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶206~208℃-OCH3-CH3大黄素甲醚(Physcion)砖红色针晶207℃-H-CH3大黄酚(Chyrs

3、ophanol)金色片状结晶196℃酸性强弱：大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酚≈大黄素甲醚极性强弱：大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄甲醚＞大黄酚三　实验方法1酸水解取大黄粉10g，加20%的硫酸水溶液100ml，直火加热1小时，过滤，滤饼水洗中性，干燥。2总羟基蒽醌苷元的提取干燥的滤饼置索氏提取器中，加入乙醚，回流提取2.5小时，得乙醚提取液。3pH梯度萃取法分离大黄中的蒽醌苷元　　　　　　　乙醚液　　　　　2.5%NaHCO350ml(分三次)碱液　　　　　　　　乙醚液盐酸调pH=22.5%Na2CO350ml（分三次）沉淀(大黄酸)碱液　　　　乙醚液盐酸调pH=25

4、%Na2CO360ml(分四次)沉淀(大黄素)碱液　　　　　　　乙醚液盐酸调pH=21%NaOH60ml(分四次)沉淀(芦荟大黄素)碱液乙醚液(大黄酚+大黄素甲醚)　　　　萃取效果以TLC来确定。4五种羟基蒽醌苷元的分离精制（1）大黄酸的精制将2.5%NaHCO3萃取物干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。（2）用硅胶柱色谱法分离精制大黄素①装柱：取100－200目的硅胶约10g，按干法或湿法装柱②加样：湿法或干法上样大黄素粗品。③洗脱，鉴定，合并：用石油醚：乙酸乙酯（7：3）为洗脱剂洗脱，分段收集，用硅胶薄层

5、跟踪检查。合并大黄素部分。④放置析晶：大黄素部分适当浓缩，放置析晶，得纯品大黄素。（3）芦荟大黄素的精制PH梯度萃取法得到的芦荟大黄素沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。（4）用离心薄层层析法分离大黄酚和大黄素甲醚①圆形硅胶薄层板的制备：硅胶G-CMC-Na（30g+75~80ml0.4%CMC-Na）②进样：大黄酚和大黄素甲醚混合物③洗脱：石油醚—乙酸乙酯④鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。（5）用快速制备液相色谱法分离大黄酚和大黄素甲醚吸附剂：硅胶洗脱剂：石油醚—乙酸乙酯鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲

6、醚。5大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的鉴定(1)颜色反应大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚与碱及醋酸镁的颜色反应并与茜草素比较颜色的不同。(2)熔点测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚(3)TLC大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的薄层鉴定(4)IR用溴化钾压片法，测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的红外光谱。四实验指导1．本实验要点及注意事项。①PH梯度萃取的原理及注意事项。②如何设计萃取分离方案的程序与方法。③蒽醌化合物红外光谱的特点。④分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜乙

7、醚，回洗碱水液。⑤碱液的配制要准确。⑥每步萃取时，利用色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。⑦硅胶色谱柱的装柱的操作，避免柱中存有气泡。⑧索氏提取器的使用方法、原理、注意事项。⑨用乙醚回流洗脱时应注意防火。2．实验报告要求①记录大黄总蒽醌的提取方法。②总蒽醌的色谱检查结果（附色谱图）。③记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的色谱检查结果，与原设计有何出入，原因何在？④记录大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及色谱、红外光谱的鉴定结果。