缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系论文

《缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、缺氧时缺氧诱导因子1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系论文【摘要】目的研究缺氧诱导因子1α（hypoxiainduciblefactor1α，HIF1α）在缺氧的胃癌细胞SGC7901的表达及其同缺氧时Fas、PA关系，探讨HIF1α同缺氧时胃癌细胞增殖凋亡的关系。方法产气袋法(GasPaK)制造缺氧细胞培养条件，细胞免疫化学观察SGC7901细胞HIF1α、PA及Fas的变化。结果缺氧时SGC7901细胞HIF1α表达明显上调，HIF1α表达随缺氧时间延长而增加。缺氧时HIF1α表

2、达与Fas呈负相关（P0.05），同PA表达无关。结论缺氧能使SGC7901细胞HIF1α表达明显上调，HIF1α抑制缺氧诱导的细胞凋亡，同缺氧时胃癌细胞增殖无关。【关键词】缺氧诱导因子1α胃癌细胞SGC7901细胞凋亡；增殖ExpressionofHIF1αandItsRelationshiptoApoptosisandProliferationinGastricCancerCellDuringHypoxiaKeyl的细胞悬液。并分为对照组、缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。各取细胞悬液2ml/孔分

3、别接种于装有盖玻片的6孔培养板内。对照组入CO2培养箱（20%氧、5%CO2、75%氮、37℃）中培养72h，缺氧4h组、缺氧8h组、缺氧16h组。分别入CO2培养箱培养68、64、56h后，再入微缺氧装置内继续培养4、8、16h。1.2.3SP免疫组化法检测HIF1α、Fas、PA取出6孔板内已爬满细胞的盖玻片，PBS洗涤，4%多聚甲醛固定,0.3%H2O2/甲醇作用30min,正常羊血清阻断30min,分别给缺氧组和对照组依次加入稀释的一抗HIF1α、Fas、PA，4℃孵育过夜,生物素化二抗和辣根过氧化物酶标

4、记的链霉卵白素依次处理(37℃,孵育30min),期间均用PBS洗涤,AEC显色,水溶性封片剂封片。每次染色时均以PBS代替一抗作为阴性对照。1.2.4判断标准排除爬片边沿细胞，10×10低倍镜下随机选取10个细胞分布均匀的视野，10×20中倍镜下随机计数50个细胞／每视野。按着色强弱分4个等级，按公式HSCORE＝∑Ｐi(i+1)(i=0、1、2、3;Pi表示评分为i的比例)计算HSCORE得分。1.3统计学处理所有数据均用±s表示，采用F检验及q检验分析，数据均用统计软件包SAS8.0分析。用Spearman等级

5、相关分析HIF1α同SGC7901细胞PA、Fas的相互关系。2结果2.1不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901HIF1α、Fas、PA的表达常规培养条件下SGC7901细胞仅个别细胞有HIF1α阳性表达，低氧处理4h后HIF1α出现阳性表达，并随低氧处理时间的延长逐渐增加（rs=0.935），见图1。常规培养条件下Fas、PA均在SGC7901细胞有阳性表达，低氧处理4h后Fas表达增加，但随低氧处理时间的延长，Fas表达所有下降（rs=-0.972），见图2、3。PA在不同氧状态下的表达无明显差异

6、，见表1。表1不同氧状态下HIF1α、Fas和PA在SGC7901细胞的表达常规培养条件下由于HIF1α在SGC7901细胞低表达，无法判断其同Fas及PA的关系。缺氧条件下SGC7901细胞HIF1α表达同Fas表达呈负相关（rs=-0.961,P0.05），同PA表达无关（rs=-0.632,P0.05）。3讨论3.1HIF1α在不同氧状态下人胃癌细胞株SGC7901的表达Zhong等7对包括胃癌、胰腺癌等癌组织标本及人体正常组织分析发现，大多数人体正常组织中没有或仅有弱阳性的HIF1表达，而癌

7、组织中HIF1呈过度表达。体外实验也证实HIF1α在多种肿瘤细胞株缺氧时呈阳性表达8，9，本研究发现SGC7901细胞在常氧下仅个别细胞HIF1α呈阳性表达，阳性表达部位在胞核,阳性率仅在1%～3%。可以认为在常氧下SGC7901细胞不表达HIF1α，在低氧处理后，HIF1α表达明显上调。可能同缺氧阻止了HIF1α的降解，使在非缺氧时易降解的HIF1α蛋白稳定性增加。HIF1α蛋白水平呈指数增加有关10，11。本研究还发现HIF1α表达随缺氧时间的延长逐渐增加，是否同SGC7901细胞逐渐适应

8、缺氧有关，尚待进一步研究。3.2缺氧状态下SGC7901细胞HIF1α的表达同细胞凋亡的关系缺氧能诱导肿瘤细胞凋亡，己在实验研究中得到证实9。但缺氧时HIF1α的表达同细胞凋亡的关系尚存有争议。Akakura等［10］在胰腺癌的研究中发现HIF1α高表达的胰腺癌细胞比无HIF1α表达的更能抵抗缺氧和无糖所诱导的凋亡。HIF1α高表达